产品目录

本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和胞浆蛋白，提取制备过程简便，制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(Gel shift Assay)、免疫共沉淀、WesternBlotting和酶活性测定等后续蛋白质研究，每次可从1×10⁷个培养细胞或200mg组织中提取所需的蛋白质，可以使用50次。

• 最大限度保持蛋白质活性，可以用于EMSA、Pull down或Enzyme activity assay等实验。
  
• 整个操作过程只需要1h左右。
  
• 即可以用于培养细胞(50×10⁷个)，也可用于动物组织(50×200mg)蛋白质的提取。
  
• 避免蛋白酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性及天然活性。
  
• 可以同时处理多个样品。

• 所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保持蛋白质的完整性及活性；
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完
  毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• Buffer B性状较为黏稠，在吸取前将枪头孔剪大一些方便吸取，尽可能的保证规定用量，避免误差值过大影响分层效果；
  
• 如果紧实细胞体积不同，请参考下表加入各种缓冲液；
  

  紧实细胞体积(μL)	Buffer A(μL)	Buffer B(μL)	Buffer C(μL)
  10	100	5.5	50
  20	200	11	100
  50	500	27.5	250
  100	1000	55	500

• 一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将提取的蛋白样品(特别是核蛋白)进行透析脱盐。
  
• 可以使用(GS1466)Sephadex重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
  
• 如果需要，请在实验前向Buffer A和C中加入1倍浓度的百奥莱博的磷酸酶抑制试剂(产品编号GS1415或GS1416或GS1417)，再进行动物组织或细胞蛋白质的提取。
  
• 对于提取的蛋白质，可以采用我公司生产的改良型BCA蛋白质浓度定量试剂盒(GS1483)或非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(GS1485)或改良型Braford蛋白质浓度定量试剂盒(GS1482)对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，请用我司生产的铜染(GS1532)或锌染(GS1534)或质谱用快速银染试剂盒(GS1419)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响；对于一般的染色可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液(GS1479)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(GS1549)或通用型蛋白染色液(GS2027)进行染色。
  
• 使用后，请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 对于悬浮培养的细胞或用细胞刮刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中，4℃，500g离心10min，弃掉培养液，再向离心管中加入10mL预冷的1X PBS漂洗液，1000rpm离心5min，重复洗两次
  
• 4℃，1000g(3350rpm)，离心3min收集细胞，用移液枪尽可能吸去上清，清除残液，预估细胞离心后的紧实细胞体积；
  
  • 如果是组织样本，将组织剪切成小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，加入适量的预冷的1X PBS，均质匀浆10～15次后，冰上静置5min，小心吸取上清转移至另一离心管中，弃掉沉淀，保留上清于4℃，1000g (3350rpm)，离心3min，弃掉上清，预估离心后的紧实细胞体积。
• 向每20μL紧实细胞体积中加入200μL预冷的Buffer A(使用前每1mL Buffer A加入1μL DTT，10μL PMSF，1μL蛋白酶抑制剂)，涡旋剧烈振荡(涡旋仪调到最大转速)15sec，冰上静置10～15min；
  
• 加入11μL预冷的Buffer B，涡旋剧烈振荡(涡旋仪调到最大转速)5sec，冰上静置1min；
  
• 再次涡旋剧烈振荡(涡旋仪调到最大转速)5sec，转移至冷冻离心机4℃，14000g (12500rpm)，离心5min，这时可以看见溶液分为三层：下层为透明层，中间层为白色胞核沉淀，上层为上清层；
  
• 尽快将上清转入新预冷的洁净微量离心管中，置于冰上即得胞浆蛋白，分装并保存于-80℃，避免反复冻融；
  
• 用枪头伸入到离心管的底部，将最下层的液体吸出并丢弃，在白色胞核沉淀物(细胞核)中加入100μL预冷的Buffer C(使用前向每1mL Buffer C中加入1μL DTT，10μL PMSF，1μL蛋白酶抑制剂)，涡旋剧烈振荡(涡旋仪调到最大转速)10sec，置于摇床中冰浴40min，150次/min，再次振荡30sec；
  
• 将混悬液于4℃，14000g (12500rpm)，离心5min，尽快将上清转入新预冷的洁净微量离心管中，即得核蛋白，分装并保存于-80℃，避免反复冻融。