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CNBr-琼脂糖凝胶4FF采用平均粒径为40～165μm的4%高度交联琼脂糖凝胶，表面用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，用它合成的亲和填料及固定化酶可避免蛋白之间位阻以及蛋白和填料的位阻干扰，使其同等配基下有更高载量，同时有更好的分辨率。由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。由于经过接枝即使是纯化病毒，抗体等大分子的物质，载量基本保持不变。可以在水相或者有机相中偶联。提供的该产品已活化。

• 偶联条件温和(pH8～10、4～45℃、时间1~16h)，偶联效率高(18～30mg/mL BSA)/(25～60mg/mL α-胰凝乳蛋白酶)。
  
• 填料不需要处理，直接计算合适的量用于偶联。
  
• 保存时间长，4～8℃可以保存18个月。
  
• 刚性强，耐压性好，流速快(80cm/h，0.1bar)。
  
• 配基不宜脱落。
  
• 可偶联包含多糖，蛋白，核酸，抗体以及其他含有-NH2配基的物质，使用范围广。
  
• 化学稳定性可耐受8M尿素，6M盐酸胍，70%乙醇及常用的水溶性缓冲液。

• 活化的填料现取现用，免时间过长造成偶联活性降低。其余的可以密封4～8℃保存18个月，避免潮解。
  
• 如果要偶联的蛋白不稳定，可在摇床上4℃振荡偶联12~16h，以维持配基的活性。如果没有把握可以配相应浓度的配基溶液0.5～1mL，分别选择不同pH及温度然后不加填料模拟偶联条件，到时间观察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶联效果就不好，这时可以稍微降低pH或温度，同时可以加2.5%左右的甘油或PEG保护蛋白，避免沉淀，总之对于任何配基最好能了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。
  
• 偶联配基后尽快清洗填料，避免在高pH条件中，配基失活。
  
• 更稳定的配基可以直接溶解于NaOH溶液或者碳酸钠溶液中进行偶联，温度可适当提高，偶联时间则相应缩短至1~4h。
  
• 偶联蛋白的最适pH可以在8.0～10.0左右，在室温或4℃均可，温度与pH的提高均能增加配基的吸附载量，根据蛋白的稳定选择合适的pH和温度，偶联蛋白溶液的浓度为5～20mg/mL。填料体积和配基溶液的体积为1：1.5或者为1：2。
  
• 偶联的缓冲液包括碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的物质。
  
• 偶联的物质如果是小分子的化合物，例如氨基酸或其他带-NH2的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05M的NaOH或0.5M的碳酸钠溶液中配置成10～20mg/mL的溶液，其他条件不变，这样偶联效果更好。
  
• 在偶联中可以用磁力搅拌器或者别的机械搅拌，但是需要速度慢些，避免填料破碎影响流速，只要把填料能混匀完全悬浮起来即可，避免剧烈搅拌使填料有小颗粒降低流速。如果装柱流速慢可以把浮在上面的小颗粒吸去以保证流速。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。

• 取100mg的BSA粉末溶解于10mL的0.1M碳酸钠缓冲液(pH8.3)中。
  
• 吸取5mL的填料加到抽滤瓶中，用3倍填料体积的1mM HCL以抽滤的方式进行清洗填料或用5倍体积1mM HCL以孵育的方式浸泡填料后丢弃上清，尽量吸干液体。
  
• 将清洗完毕的填料加入溶解后的BSA溶液中混合，在摇床上振荡(不可剧烈振荡以免柱料损坏)，25℃偶联1~3h或4℃过夜。
  
• 可直接加入50mg甘氨酸粉末至偶联后含有上清液的填料中或将偶联后的上清液抽滤掉后加入3～5倍填料体积的0.1M Tris-HCL(pH8.3)，在摇床上振荡(不可剧烈振荡以免柱料损坏)，再反应2~4h封闭剩余的基团。
  
• 偶联BSA的填料可以装在柱子中，然后用0.5M的NaCl溶液洗5～10个柱床体积，收集装柱子的液体以及清洗柱子的溶液测定BSA的总量，再用纯水冲10个柱床体积，最后将填料放至20%乙醇溶液中保存。如果是大量的偶联，可以选择G3砂心漏斗或者滤器上按上面的方法清洗，用20倍填料体积，分3～5次清洗。
  
• BSA的偶联量计算方法：BSA的吸附载量=(G₀-G₁)/V。
  G₀：偶联前BSA总蛋白量，单位：mg
  G₁：偶联反应后未偶联的BSA的量，单位：mg
  V：填料的体积，单位：mL
  备注：该偶联方法可用于偶联单抗及其它蛋白，均能获得很好的偶联效果。