产品货号:
GS1469
中文名称:
IgG树脂
英文名称:
IgG Resin
产品规格:
1mL|5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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IgG树脂是采用平均粒径为45~165μm的4%高度交联琼脂糖凝胶经过溴化氰活化后,再将人的IgG共价连接而成,它可以用来纯化和抗体结合的各种蛋白,例如Protein A、Protein G和分泌型表达载体pEZZ18所表达的含有两个人工合成的Z抗体结合区的融合蛋白,提供的该IgG纯化树脂为悬浮液,纯化树脂含量为50%。
- 配体为人IgG,载量6~10mg人IgG/mL纯化树脂。
- 结合量为大于2mg Protein A/mL纯化树脂。
- pH范围为3~10,保存温度2~8℃,含有20%的乙醇。
- 刚性强,流速快(300cm/h、100 kpa)。
- 基团脱落少,结合特异性强,载量高,寿命长。
组分 | 1mL | 5mL |
IgG树脂 | 1mL | 5mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:4℃,不可冻存,有效期2年。
- 结合液(Tris-saline Tween 20,TST):50mM Tris buffer(pH7.6),150mM NaCl,0.05% Tween 20。
- 洗脱液:500mM乙酸用乙酸铵调节pH到3.4,或100mM Glycine-HCl(pH3.0)。
- 洗涤液:5mM乙酸铵,pH5.0。
- 本制品从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温,然后再装柱,以免产生气泡影响柱效。
- 一般吸附是采用pH7~8的缓冲液,洗脱是用低pH缓冲液,洗脱时间应短,然后用纯水尽快洗到pH中性,可延长亲和填料的使用寿命。
- 用低pH缓冲液洗脱后,应立刻用1M的Tris-HCl(pH9.0左右)将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.0左右),以利于维持样品的生物活性,避免抗体失活。
- 通常使用后该亲和填料应用0.5M醋酸缓冲液(pH3.4)做再生处理,然而长期采用极端的洗脱条件将使亲和填料的寿命缩短。所以当用0.5M醋酸缓冲液(pH3.4)做再生处理后,需要用TST平衡到中性,再加入终浓度为20%的乙醇,以方便保存。本公司生产的IgG亲和填料杂吸附较少,故可相应减少再生处理的频率,一般每使用5次再生1次即可。
- IgG亲和填料的其它再生处理方法:亲和填料和柱子使用10次后最好先用20%乙醇洗5个柱床体积,然后再用70%乙醇洗脱5~10个柱床体积,可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质,避免使亲和填料的载量下降、干扰亲和填料的应用效果。
- 在样品制备和纯化过程中,应该避免使用DTT、TECP等还原试剂,因为会破坏人IgG的结构,从而对IgG亲和填料的性能和使用寿命产生影响。
- 在使用过程中,可能会有少量的色素沉积在IgG亲和填料上,但是不会影响对IgG亲和填料的性能。
- 用至少5倍柱床体积的TST清洗IgG纯化树脂,以便完全去除残留的含有乙醇的保存液。
- 用至少2倍柱床体积的以下溶液依次平衡IgG纯化树脂一次,
① 0.5M乙酸(pH3.4);
② TST;
③ 0.5M乙酸(pH3.4);
最后再用2倍柱床体积的TST平衡IgG纯化树脂两次。 - 将所要纯化的含有目的蛋白的清澈的细菌裂解液、细胞上清或培养基的pH调整到中性,再将样品加入含有IgG纯化树脂纯化柱中。
- 静止5min后,再用5倍柱床体积的TST清洗IgG,纯化树脂两次;再用2倍柱床体积的5mM NH4Ac pH5.0清洗两次。
- 用0.5M HAc pH3.4或者0.1M Glycine-HCl pH3.0洗脱收集目的蛋白,同时1M的Tris-HCl(pH9.0左右)调节pH到中性。
- 采用BCA法(GS1480)或(GS1484)定量确定蛋白浓度,采用SDS-PAGE确定蛋白的大致纯度。
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