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蓝色琼脂糖重力柱图片
产品货号:
GS1465
中文名称:
蓝色琼脂糖重力柱
英文名称:
Blue Beadose 6FF Column
产品规格:
1个
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

蓝色琼脂糖纯化树脂是活性蓝3G通过三嗪偶联法共价连接到琼脂糖基质上的。蓝色染料能够结合多种蛋白质,如白蛋白,干扰素,脂蛋白和凝血因子等的亲和层析介质。还能够结合包括激酶,脱氢酶和大多数需要含腺苷基因子的酶。高度交联的基质提供了一个稳定的刚性的传质环境,可耐受较高流速及更高的化学稳定性。




总结合能力每mL填料结合>18mg HSA/BSA
配体密度约7 μmol/mL活性蓝3G介质
平均尺寸90μm(45~165μm)
基质6%高度交联的琼脂糖
线性流速约200~400cm/h,300cm/h(25℃,XK50/30柱,15cm柱高)
耐压性0.3 Mpa
pH稳定性4~12长期,3~13(2h)
化学稳定性40℃,70%乙醇,6M盐酸胍,8M尿素
影响因素Tween-20等与结合缓冲液中的类似去污剂会减少结合白蛋白载量
保存液20%乙醇



组分规格
蓝色琼脂糖重力柱1个
说明书1份

保存:2~8℃


所用水和缓冲液在使用前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤以人血清白蛋白(HSA)为例。
  • Binding/Wash Buffer:50mM Na2HPO4,50mM柠檬酸钠,pH7.0。
  • Elution Buffer:50mM Na2HPO4,50mM柠檬酸钠,1-2M NaCl,pH7.0。
注意:Binding/Wash Buffer和Elution Buffer可根据样品性质进行适当改变,原则是低盐上样高盐洗脱。


样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。


Blue Beadose 6FF被广泛应用于工业纯化,下面介绍使用Blue Beadose 6FF填装层析柱的方法。
层析柱的装填(使用储液器装填)
  • 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1~2cm的去离子水。
  • 将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
  • 如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上避免在分配器或进样管中产生气泡。
  • 打开层析柱底部出口,开启泵使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。(注意:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%)当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
  • 关闭泵,关闭层析柱出口。
  • 如果使用储液器,去除储液器,将分配器置于层析柱中。
  • 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
  • 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡,如果需要可以重新调整分配器。



样品纯化:
Blue Beadose 6FF装填好后,可以用各种常规的中低压色谱系统。
  • 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中,打开下出口将预装柱接到色谱系统中并旋紧。
  • 用3~5倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
  • 使用至少5倍柱床体积的Binding/Wash Buffer平衡色谱柱。
  • 利用泵或样品环上样。
    注意:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
  • 用Binding/Wash Buffer冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10~15个柱体积)
  • 使用5~10倍柱体积的Elution Buffer洗脱,收集洗脱液,即目的蛋白组分。


SDS-PAGE检测:
将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

填料清洗:
Blue Beadose 6FF纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

去除一些沉淀或变性物质,建议使用下面的方法:
用3~4倍柱体积的0.1M NaOH,然后用3~4倍柱体积的70%乙醇或2M硫氰酸钾溶液清洗,然后立即用5倍柱体积的Binding/Wash Buffer平衡。

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质:
用3~4倍柱体积的70%的乙醇或30%的异丙醇或1%的Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的Binding/Wash Buffer平衡。

注意事项:
  • 对于随后的色谱法,不得超过填充流速的75%。
  • 达到恒定高度后,需要保持至少3倍床体积的填充流速,标记柱上的床高。
  • 停止泵并关闭柱出口。
  • 如果使用包装容器,断开储存器,并将适配器装入色谱柱。
  • 将适配器向下推入色谱柱,直至达到标记。使溶液冲洗适配器入口,将适配器锁定到位。
  • 将色谱柱连接到泵或色谱系统平衡,必要时重新调整适配器。


评估方法:
为了检查树脂质量和在柱的使用寿命期间对其进行监测,填充柱的分离效率应在填充后和再使用前直接进行测试,查看分离性能是否变差。体现柱效率的最佳方法是填充柱的高度是否等于理论塔板的高度,HETP和不对称因子As。通过将1%(v/v)丙酮溶液的样品应用于该填充柱,可容易地确定这些值。氯化钠也可用作测试物质,使用浓度为2.0M的NaCl水溶液测试,0.5M NaCl的水溶液作为洗脱剂。计算的板数将根据测试条件而变化,因此应仅用作参考值。条件和设备保持不变结果才具有可比性。溶质,溶剂,洗脱液,样品体积,流速,液体通道,温度等的变化会影响结果。为获得最佳效果,样品体积应的最大值不要超过柱体积的2.5%,流速在15和30cm/h之间。
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