产品目录

血清作为研究人和其他动物蛋白质组学的重要样本，其中的白蛋白和免疫球蛋白占血清总蛋白的60%以上。经济有效地去除血清中的高丰度蛋白，分离富集低丰度蛋白，已成为蛋白质组学研究中血清样品制备的先决条件之一。本制品针对清除血清中的高丰度蛋白(白蛋白和免疫球蛋白)而设计，为研究血清中的低丰度蛋白提供了极大的便捷。使用本制品一次可以除去60%以上的白蛋白和80%以上的免疫球蛋白，而且基本不损耗其它的低丰度蛋白，血清中的低丰度蛋白经分离富集后，可运用于SDS-PAGE、2D电泳和MS分析等后续实验，能够使用5次，每次可以处理多达120μL左右的血清样品。

• 对免疫球蛋白和血清白蛋白的去除效率在60%以上；
  
• 这个实验只需要两个小时左右；
  
• 比国外同类型的产品价格低一半以上。

• 在取血清样品之前，需要对血清进行4℃，13000rpm(15000g)离心15min，去除沉淀和上层的脂质层，以减少对下游操作的干扰。
  
• 将冷冻干燥沉淀用于PAGE电泳和MS等分析时，必须将样品充分悬浮，以防止样品蛋白质点数的减少。
  
• 整个操作必须保持在低温条件下进行。
  
• 因不同来源的血清中免疫球蛋白的含量不同，故可根据实际情况适当调整每次Protein A Beadose的用量。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。

• 将离心柱套放到收集管中，取200μL充分混匀的Protein A Beadose，置于离心柱中，再加入600μL洗液D，盖上盖子，轻轻颠倒混匀，Protein A Beadose充分悬浮后，3000rpm离心3min，弃收集管中的滤液，如此重复洗柱子4次。
  
• 取115μL血清，加入230μL溶液A，在自备的1.5mL离心管中充分混匀后，将血清与溶液A混合液加到经步骤1清洗后的离心柱中。盖上盖子，轻轻颠倒混匀，使Protein A Beadose充分悬浮。
  
• 将经步骤2处理后的柱子置于摇床上，4℃，轻轻振荡1~2h。
  
• 将离心柱套转置一支干净的1.5mL离心管(用户自备，可以选用EP管，锥底管，离心管等)中，3000rpm离心3min，收集离心管中的滤液。
  
• 再将离心柱套转置另一支干净的1.5mL离心管(用户自备，可以选用EP管，锥底管，离心管等)中，往离心柱中加入200μL洗液D，盖上盖子，轻轻颠倒混匀，使Protein A Beadose充分悬浮。3000rpm离心3min，收集收集管中的滤液。
  
• 合并步骤4和步骤5收集的滤液，此滤液即是清除后的大部分免疫球蛋白的血清蛋白，将此滤液和溶液B冰浴预冷10min，期间轻轻颠倒混匀1～2次。
  
• 取500μL预冷的滤液，缓慢加入362μL预冷的溶液B，轻轻颠倒混匀后，置于-20℃冷冻柜中静置1h，期间轻轻颠倒混匀
  1～2次。
  
  • 步骤7中加入溶液B前必须要预冷后使用，并且需要缓慢加入到滤液中，不可过快，否则会影响沉淀的形成。因为不同血清样品中的白蛋白含量不同，可适当延长静置于-20℃冷冻柜中的时间至2h。
• 转置冷冻离心机中，4℃，转速15000rpm(20000g)，离心30min。
  
• 小心地将上清(含大部分的白蛋白)吸去。再4℃，转速15000rpm(20000g)，离心1min，吸去残余的上清，沉淀即除去大部分免疫球蛋白和白蛋白的血清蛋白，可用于SDS-PAGE电泳或-20℃保存。
  
• 若需进行MS分析和2D电泳等，需往步骤9所得沉淀中加入1mL冰浴预冷的溶液C，振荡混匀后，置于-20℃冷冻柜中静置15min。之后，4℃，转速15000rpm(20000g)，离心20min，小心地弃掉上清，沉淀经冷冻干燥后即可用于MS和2D电泳分析。
  
  • 步骤10中的沉淀，可采用含有Urea、thiourea、SB3-10等强溶解能力试剂的溶解液有助于沉淀蛋白的完全溶解。