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在常规的Western Blot、Dot Blot和ELISA实验中，为防止印迹膜上的很多非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合引起非特异的条带而产生高背景，一般用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点来降低抗体的非特异性结合。通常的封闭条件为室温1~2h或4℃过夜。本制品采用特殊配方使封闭时间缩短为10min左右，显色后背景干净，同时不降低免疫印迹反应的灵敏度。主要封闭成分为脱脂奶粉；Western Blot和Dot Blot可以使用20次，ELISA可以做100次分析。

• 混合后的封闭工作液最好现配现用，配好的封闭工作液可回收利用2～3次，2～8℃保存，一周内使用完毕。
  
• 使用完毕后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发或与空气中的物质发生化学反应，将剩余的试剂2～8℃保存，以避免长菌导致污染。
  
• 在进行封闭前可以使用百奥莱博生产超敏可逆印迹膜染色试剂盒I(货号：GS1538)来确定蛋白质的电转移效率。
  
• 显色时可以使用百奥莱博的DAB(货号：GS1569或GS1537)或TMB(货号：GS1539)或NBT/BCIP(货号：GS1570)显色试剂盒来显色。
  
• 有时BSA比脱脂奶粉更有利于降低非特异性背景，而有些抗体则在脱脂奶粉封闭的情况下才能得到清晰的背景。
  
• 当要用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶检测系统或用于磷酸化抗体检测磷酸化蛋白，建议使用此产品或无蛋白封闭液(货号：GS1583)进行封闭，而不建议采用快速封闭液I(货号：GS1554)进行封闭。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。

• 称取一定量的封闭试剂II于适量的封闭缓冲液II中(根据需要量取，以6x8cm的膜为例，一般需要10mL)，使得封闭试剂的终浓度为6%(w/v)，形成封闭工作液。
  
• 将已经用1×TBS或1×PBS清洗过的印迹膜放入含有封闭工作液的容器中，使印迹膜完全浸没，在室温或37℃条件下，置于摇床上缓慢摇动10min左右。
  
• 对于ELISA实验中，将200μL的封闭工作液加入到酶标板的每个孔中，在室温或37℃条件下，置于摇床上缓慢摇动或静置10min左右。
  
• 再按照常规Western Blot，Dot Blot以及ELISA实验的要求，继续进行洗涤，一抗，二抗的加入，洗涤，显色或发光等后续实验。