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本试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的高灵敏底物检测试剂盒。本制品能够在HRP的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。其高灵敏度能够检测pg级别的抗原，发光信号强烈持久，可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。

• 为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件，包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、膜及封闭试剂的选择。
  
• 由于奶粉中含有内源性生物素，在使用亲和素/生物素系统时，封闭液中应避免使用奶粉。
  
• 建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温20(终浓度为0.05%)，以减少非特异性结合。
  
• 由于叠氮钠是HRP抑制剂，在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
  
• 免疫印迹实验进行全过程中，请确保印迹膜始终处于湿润状态，避免干燥。
  
• 为获得最佳实验效果，抗体孵育及膜洗涤步骤中请使用摇床辅助完成。
  
• 第一张片子建议1min，观察结果后调节曝光时间，多次曝光显影，以便寻找最佳曝光时间，最佳曝光时间可从10s至3min不等。
  
• 在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子，避免蛋白污染。
  
• 实验过程中，尽量用去离子水配置所用的相关溶液和洗涤器皿，污染的二价阳离子会导致X光片上的背景增加，同时保证非金属设备没有明显划痕，金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。
  
• 避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8h。如暴露于阳光或其他强光下，工作液会受影响。为获得最佳效果，可于棕色瓶中配制工作液，避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
  
• 膜片可使用我公司生产的5×蛋白印迹膜再生液(强)(货号：GS1428)或5×蛋白印迹膜再生液(温和)(货号：GS1545)或5×一抗/二抗清除液(货号：GS1567)洗脱原有结合的抗体，印迹磨再次使用。
  
• 发光强度在半小时左右达到高峰。一个小时后强度会有所下降。

• 二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。
  
  • 一抗推荐用量为0.2～1μg/mL，二抗推荐用量为10～50ng/mL。
• 根据需要量，将发光剂和稳定剂按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液(例如一张8cm×6cm的膜使用1mL工作液)。
  
• 弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育5min。
  
• 用吸水纸以吸去过量吸附在膜上的多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的保鲜膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间有气泡。
  
• 将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中，于暗室中压上X光片，使印迹膜和X光片紧贴在一起。曝光1min，再进行显影和定影，或将膜放置到荧光、化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。