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本制品为在PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。可以用于SDS-PAGE和2D电泳的凝胶检测，也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测（但背景较高），还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。

• 一站式，用户不要单独配制所需成分，简单快捷。
  
• 提供一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白，便于分析问题。
  
• 专一性强，通过共价修饰方式检测糖基，不检测蛋白部分。
  
• 快捷，只需不到两小时，而其他的染色方法需要四到五小时。
  
• 染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色
  
• 灵敏度高，理论上可以达到微克级别，但实际应用时灵敏度跟靶蛋白的糖基化程度相关。

• 配制3%醋酸溶液：将30mL自备的冰醋酸与970mL超纯水混匀，室温保存备用。
  
• 配制50%甲醇溶液：将250mL自备的甲醇与250mL超纯水混匀，室温保存备用。
  
• 配制氧化试剂溶液：将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250mL空本色塑料瓶中，然后加入250mL的3%醋酸溶液（第1步配制），充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，室温保存备用。
  
• 配制还原试剂溶液：将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的250mL空本色塑料瓶中，然后加入250mL的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，室温保存备用。
  
• 配制阳性对照（辣根过氧化物酶）溶液：向装有1mg辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入1mL 1×SDS-PAGE上样缓冲液（自备），所得辣根过氧化物酶溶液的浓度为1mg/mL，然后分装成100μL/管共10管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于80mm×80mm的凝胶来说，每条泳道加10μL的阳性对照溶液即可。
  
• 配制阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）溶液：向装有1mg大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入1×SDS-PAGE上样缓冲液（自备），所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度为1mg/mL，然后分装成100μL/管共10管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于80mm×80mm的凝胶来说，每个泳道加10μL的阴性对照溶液即可。
  
• 样品稀释：用SDS-PAGE上样缓冲液将蛋白样品浓度稀释为1mg/mL，SDS-PAGE上样缓冲液终浓度为1×。对于80mm×80mm的凝胶来说，每个泳道加10μL的样品。

• 凝胶染色
  
  • 取出电泳后的SDS-PAGE凝胶，加入到装有100mL 50%甲醇溶液的器皿中，完全浸泡30分钟后，倒出甲醇溶液。
    
  • 用100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块两次，每次轻轻振荡10分钟。
    
  • 将PAGE胶块转移到装有25mL氧化试剂的器皿中，轻轻振荡15分钟。
    
  • 用100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块3次，每次轻轻振荡5分钟。
    
  • 将胶块转移到装有25mL糖蛋白染色试剂的器皿中，轻轻振荡15分钟。
    
    • 若染色试剂中有晶体析出，只需取上清液即可，不要加热溶解晶体。
  • 将胶块转移到装有25mL还原试剂的器皿中，轻轻振荡5分钟。
    
  • 用3%醋酸溶液洗涤胶块，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%醋酸溶液中。
• 硝化纤维素膜染色
  
  • 用20mL 3%醋酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡10分钟。
    
  • 将膜转移到10mL的氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。
    
  • 用10mL 3%醋酸溶液洗涤膜3次，每次轻轻振荡5分钟。
    
  • 将膜转移到10mL的糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。
    
    • 若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。
  • 将膜转移到10mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。
    
  • 用3%醋酸溶液洗涤膜，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%醋酸溶液中。
    
  • 检测后如果没有条带，可以用转膜后的PAGE胶进行检测，因为糖蛋白（尤其是高度糖基化的蛋白）转膜效果比较差。