产品目录

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本制品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本制品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。

• 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
  
• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
  
• 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

• 对于培养细胞样品：
  
  • 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 裂解细胞
    
    • 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1～2秒后，细胞就会被裂解。
      
    • 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/管，然后再裂解。
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    
    • 通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μL或250μL。
• 对于组织样品：
  
  • 把组织剪切成细小的碎片。
    
  • 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 按照每20毫克组织加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
    
  • 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    
  • 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
    
    • RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。