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可逆蛋白印迹染色是一种灵敏的检测硝酸纤维素膜或者PVDF膜上转移蛋白的方法，可以非常有效的检测蛋白转膜效果。传统的丽春红染色（Ponceau S）敏感度非常低（250ng），染色退色快并且红色不容易拍照保存。独特配方的染色液具有蛋白高亲和性，和蛋白印迹膜上蛋白快速结合呈现清晰的兰色，敏感度比传统丽春红染色高10倍（<25ng）。此外染色液中特殊化合物和蛋白的结合力主要是离子键的可逆结合，不影响后续的Western blot。该试剂盒常用于Western blot分析前证实蛋白确实转膜成功，并可以估计不同泳道蛋白上样量是否基本一致。

• 无背景染色，敏感度高，比传统丽春红染色高10倍。
  
• 蛋白染成翠兰色，解决了丽春红染色红色不易照相保存的问题。
  
• 可逆染色，完全不影响蛋白性质，不影响抗体抗原结合性质Western blot实验，和质谱分析、N末端测序等兼容。
  
• 步骤简单，方便快速。
  
• 推荐使用硝酸纤维素膜，大部分情况染膜效果优于PVDF膜。

• 染色
  
  • 转膜后将印迹膜放置于一个干净的容器中，倒入纯水涮洗几秒钟倒空。如果是干燥的PVDF膜，用100％甲醇湿化。
    
  • 根据膜大小倒入适量的染色液（只要确保膜都浸没在染色液内就可以，10～20mL足够染色一块普通的8×8cm的硝酸纤维膜），用手轻摇染色30～60秒（也可根据染色情况延长）。染上色的蛋白条带会呈现兰条带。
• 漂洗（去除背景染色）
  
  • 倒弃染色剂，加入适量的漂洗液后，涮洗5～10秒钟后倒去，重复该步骤一遍(如背景高，可适当延长漂洗时间)。
    
  • 再加入适量漂洗液后，摇床上中速振摇2～5分钟。
    
  • 可选步骤（仅用于PVDF膜）：如果PVDF膜漂洗效果不理想，可以加用20％甲醇漂洗一次。
    
  • 倒弃漂洗液，加入适量纯水后，涮洗5～10秒钟后倒去，重复该步骤一遍(如背景高，可适当延长漂洗时间)，此时可以观察到翠兰的蛋白条带。
    
  • 加入适量纯水后，摇床上中速振摇2～5分钟。观察到满意条带后，此时处于湿润状态的膜（放在纯水中照相对比效果更好）就可以照相了。
• 脱色（消除蛋白条带染色）
  
  • 倒弃纯水后，加入20～30mL脱色液，摇床上中速振摇2分钟。
    
    • 对大部分蛋白，2分钟中速振摇比较合适，但也可延长时间到5分钟，脱色迅速的只要结果满意即可中止脱色。
  • 倒弃脱色液，加入适量纯水后，涮洗5～10秒钟后倒去，重复该步骤一遍。

• 没有见到条带或者只有微弱的条带
  
  • 上样蛋白浓度太低了，检测上样蛋白的浓度。
    
  • 转膜效率太低。检查转膜过程。
• 蛋白条带没有完全脱色
  
  • 膜在脱色前干了。应该保持膜一直处于湿润状态。
    
  • 样品中蛋白浓度太高了，上样量太多。可以延长脱色时间到5分钟或者减少起始蛋白上样量。