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本制品以溶液形式提供，浓度为1mg/mL。用于细胞核染色时，推荐工作浓度为0.5～10μg/mL。如需使用粉末状该产品，可选购Hoechst 33258(货号：SY0497)。

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。可用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可用于活细胞或组织的细胞核染色。

中文名称	二苯甲亚胺，三氯化氢2'-(4-羟基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5'-二-1H-苯并咪唑
英文名称	2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5'-bi-1H-benzimidazole,Trihydrochloride；bisBenzimide H 33258;HOE 33258
分子式	C25H24N6O·3HCl
分子量	533.88
CAS号	23491-45-4
荧光光谱	Hoechest 33258的Ex/Em=346/460;Hoechest 33258-核酸的Ex/Em=350/460;荧光可用氙气灯，泵弧灯或者UV激光激发；可用DAPI滤光器、蓝色GFP滤光器、Alexa Fluor 350滤光器等检测。
纯度	≥95%(HPLC)
结构式

• Hoechst 33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
  
• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
  
• 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 对于固定的细胞或组织：
  
  • 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
    
  • 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，并混匀。室温放置3～5分钟。
    
  • 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2～3次，每次3～5分钟。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。观察细胞凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。激发波长350nm，发射波长460nm。
• 对于活细胞或组织：
  
  • 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100μL染色液。
    
  • 在适宜于细胞培养的温度培养20～30分钟。
    
  • 弃染色液，用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。