Oligo探针-DNA靶分子FISH试剂盒

产品货号：

KL8240623

中文名称：

英文名称：

DNA Oligo Probe-DNA Target FISH Kit

产品规格：

200T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

本制品是一种DNA Oligo-DNA荧光原位杂交检测试剂盒。本制品可通过将荧光标记的DNA Oligo探针与细胞或组织中的目标DNA进行杂交，形成荧光标记的杂交复合物，进而可以在荧光显微镜下观察并确定目标DNA细胞内的定位。

产品特点：

操作简单便捷。通常一天内即可完成检测。
自备的荧光标记Oligo DNA探针与其靶DNA形成杂交复合物后，可直接进行荧光观察。
背景低、灵敏度高。提供专门的乙酰化试剂和封堵DNA溶液，前者可以中和正电基团减少探针的非特异结合，后者可以封堵非特异结合位点减少非特异结合，提高检测灵敏度。
样品适用范围广，可用于多聚甲醛或福尔马林固定的组织、石蜡或冰冻切片以及细胞等样本的靶DNA的定位分析。
用户可以选择任何荧光显微镜兼容的荧光探针，不同荧光探针可以分别跟DAPI、Hoechst 33342、Hoechst 33258、或Propidium Iodide等通用细胞核荧光染料结合，便于精准定位荧光探针的杂交位点。本试剂盒只提供DAPI染液。

产品组成：

保存：-20℃，有效期6个月。

用户自备：

自备荧光标记的Oligo DNA探针，多聚赖氨酸、4%多聚甲醛固定液、DNase/RNase free -PBS、去离子甲酰胺、自备DEPC水等。

使用方法：
一、细胞样品的预处理

细胞培养：细胞培养至6孔、12孔或24孔板上或盖玻片上(可以使用多聚赖氨酸进行预处理)，待细胞密度达到70～90%时，用PBS洗涤细胞2～3次。
使用多聚赖氨酸预处理可以有效防止后续的检测过程中细胞发生脱落。
固定：加入自备4%多聚甲醛固定液，室温固定10分钟。大多数细胞固定10分钟即可，最佳固定时间可适当调整。
洗涤：用自备的DNase/RNase free-PBS（以下简称PBS）室温摇床缓慢摇动洗涤3次，每次5分钟以去除固定液。
如果细胞容易脱落，可不进行摇动，可延长洗涤时间或增加洗涤次数。后续所有的细胞或切片的洗涤如果容易脱落，都可以不进行摇动，并都可以延长洗涤时间或增加洗涤次数。

二、冰冻切片的预处理

三、石蜡切片的预处理

四、细胞通透

五、降低背景

六、杂交

配制杂交液：取适量杂交溶液，按照1:100加入100×封堵DNA溶液并混匀，加入自备的荧光标记的DNA Oligo探针，使其终浓度为0.5～1μg/mL，避光配制。
洗涤缓冲液I：用DEPC水将20×洗涤缓冲液稀释至4×，再将其与去离子甲酰胺按照1:1混合均匀。
洗涤缓冲液II：用DEPC水将20×洗涤缓冲液稀释至2×，混匀。
洗涤缓冲液III：用DEPC水将20×洗涤缓冲液稀释至1×，混匀。
预杂交：加入适量含1×封堵DNA溶液的杂交溶液浸没细胞，样本密封，防止蒸发，放置24～65℃避光摇床孵育20分钟。
探针预处理：将含探针的杂交液放置24～65℃避光摇晃20分钟后，立刻冰浴2分钟，适当混匀后冰浴放置备用。
杂交：去除杂交溶液，滴加含探针的杂交液浸没样本，密封后放置24～65℃避光摇床杂交2～12小时。
探针回收：将含探针的杂交液回收至洁净离心管中，-20℃避光保存。
加入适量预热的洗涤缓冲液I，24～65℃避光摇床洗涤3次，每次5～20分钟。
加入适量预热的洗涤缓冲液II，24～65℃避光摇床5～20分钟，1次。
加入适量预热的洗涤缓冲液III，24～65℃避光摇床5～20分钟，1次。

七、细胞核染色

八、荧光显微观察

在荧光显微镜下，选用跟探针荧光标记兼容的激发波长和发射波长进行观察核照相，然后选择跟DAPI细胞核荧光染料兼容的激发波长和发射波长（~360nm激发，~460nm发射）进行观察和照相。如果使用自备的其他细胞核荧光染料，此步需要选择相应的波长。
也可以去除PBS，滴加抗荧光淬灭封片液或抗荧光淬灭PVP封片液浸没细胞，盖上盖玻片，荧光显微镜下拍照。
拍照后样品可放置4℃避光保存。

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