产品货号:
KFS156
中文名称:
活细胞绿色荧光探针(CDCFDA,SE)
英文名称:
CDCFDA,SE
产品规格:
10mg
发货周期:
1~3天
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CDCFDA活细胞绿色荧光探针标记细胞能有效确定总细胞的数量和一个样本中存在多少活细胞。流式细胞术结合荧光染色法是分析非均质细胞种群的有力工具。活细胞荧光示踪探针CDCFDA,SE是一个胺化FDA衍生物,可以用来制备各种FDA偶联物。
英文名称:5-(and-6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate,succinimidyl ester
光谱特性:Ex/Em=504nm/529nm
分子量:626.35
细胞制备与染色
最佳的染色探针浓度取决于不同的应用程序类型,此处建议的初始条件是基于验证的特定细胞类型,具体实验中应摸索加以调整。测试建议至少十倍的浓度范围内。一般情况下,长期染色(3天以上)或者快速分裂的细胞使用需要5~25μM的染料。更短的实验,如生存能力分析,可以采用0.5~5μM。为了减少毒性负荷,选择尽可能低的染料浓度。
- 用高品质DMSO溶解染料至终浓度为10mM储液,储液添加至无血清培养基中,保持终浓度在0.5~25μM的工作浓度,孵育温度为37℃。
- 对于悬浮细胞,当细胞浓度达到所需要求,即可离心收集细胞,弃上清,用预热的染色轻柔重悬,在细胞的生长条件下孵育15~45分钟后,离心。对于贴壁细胞,当达到合适汇合度后,去掉培养基,更换以预热的染色液,在细胞的生长条件下孵育15~45分钟。
- 更换新鲜预热的培养基,37度另外孵育30分钟,以保证胞内酯酶充分水解。
- 吸取5μL的染色菌液至载玻片上,加盖18mm正方形盖玻片,荧光显微镜观察。
如需进行流式细胞术分析,可以收集细胞,调整细胞密度在106/mL,按悬浮细胞孵育标记方法之后,上流式细胞仪进行分析。
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