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CFDA,SE可以通透细胞膜，进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化分解成CFSE，CFSE可以偶发性地并不可逆地和细胞内蛋白的Lysine残基或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白。在加入荧光探针CFDA SE后大约24小时，即可充分标记细胞。被CFDA SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数个月。CFSE标记细胞的荧光非常均一，比以前使用的其它细胞示踪荧光探针例如PKH26的荧光更加均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均匀。

由于CFDA,SE标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞(1/2的荧光强度)，分离两次的细胞(1/4的荧光强度)，分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。

CFDA,SE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测，甚至还可以用于细菌增殖的检测。

1. CFDA,SE配制成储存液后宜在一个月内使用完毕，最长不宜超过2个月。CFDA,SE易被水解，在水溶液中会很快变质。请在使用过程中避免接触水。在标记细胞的过程中和水接触是在许可的范围内的。
   
2. CFDA,SE溶剂在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
   
3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
   
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 制备标记储液：可用储液浓度为1～5mM。
   
2. 标记和检测：推荐短期标记工作液浓度：0.1μM。推荐1～2天时长的示踪标记，工作液浓度为：1～5μM。具体浓度针对不同细胞类型建议适当优化。
   注意：标记的细胞呈绿色荧光，检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为518nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。