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TdT加尾法DNA探针标记试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3'端添加dNTP尾巴的原理而设计。

• 快速，15分钟即可完成标记反应。
  
• 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3'突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
  
• 可用同位素底物和非同位素底物。
  
• 同时提供非标记的dTTP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。

• 配制反应体系：在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μL体系的标记反应。
  

  成分	用量
  自备DNA模板	100～200pmol
  5×TdT Buffer	4μL
  带标记的dUTP	1μL
  2mM dTTP	1μL或不加
  TdT末端转移酶(14U/μL)	2μL
  超纯水	至20μL

  • 如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度。
    
  • dTTP可以不加，这样得到的加尾全部是标记核苷酸，但如果使用生物素标记的dUTP，由于生物素的空间阻碍，这种探针的灵敏度并不是最佳。所以在加尾反应时掺入一定比例的dTTP，控制标记核苷酸的密度不至于太高，这样反而可以提高探针的比活。标记核苷酸和非标记的dTTP的具体比例为多少，可以自己优化。一般可以选择1:2。
• 37℃反应30分钟。如果没有非标记核苷酸存在，一般只能加尾3～5个标记的核苷酸（因为标记基团如生物素会通过空间阻碍抑制延长反应）；如果在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dTTP（其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dTTP而已），每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸。
  
• 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
  
• 如果需要，可以PAGE电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，带标记的DNA探针的泳动速度将低于没标记的DNA分子。
  
• 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
  
• 使用时需将探针以1～8ng/μL的终浓度加入到杂交液中（如果探针是双链DNA，加入前还需热变性）。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。