产品货号:
BTN221200
中文名称:
加尾法RNA探针地高辛标记试剂盒
英文名称:
产品规格:
5T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在RNA的3'端添加NTP尾巴的原理上开发的,标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
组分 | 规格 |
5×TdT Buffer | 20μL |
TdT末端转移酶(10U/μL) | 10μL |
2mM ATP | 5μL |
DIG-11-UTP | 5μL |
超纯水 | 1mL |
保存:-20℃,有效期1年。
- 在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μL体系的标记反应(如果需要标记更多探针,请增加标记体积而不要增加探针RNA的浓度):
成分 用量 自备RNA模板 100~200pmol 5×TdT Buffer 4μL DIG-11-UTP 1μL 2mM ATP 1μL或不加 TdT末端转移酶(10U/μL) 2μL 超纯水 至20μL - ATP可以不加,这样得到的加尾全部是标记核苷酸,但由于DIG或biotin的空间阻碍,这种探针的灵敏度并不是最佳。如果在加尾反应时掺入一定比例的ATP,控制标记核苷酸的密度不至于太高,这样反而可以提高探针的比活。标记核苷酸和非标记的ATP的具体比例为多少,可以自己优化。一般可以选择1∶2。
- 37℃反应30分钟。如果没有非标记核苷酸存在,一般只能加尾3~5个标记的核苷酸(因为标记基团通过空间阻碍抑制延长反应);如果在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸ATP(其他NTP也可,只是本试剂盒只提供ATP而已),每条探针上可加上约100个核苷酸,平均含5个标记核苷酸。
- 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
- 如果需要,可以PAGE电泳+银染检测标记效率,带标记的RNA探针的泳动速度将低于没标记的RNA分子。
- 如果是非同位素标记,探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针,请不要酚/氯仿抽提,因为非同位素标记物一般会使探针RNA进入有机相而丢失。
- 使用时需将探针以1~8ng/μL的终浓度加入到杂交液中。如果不立即使用,非同位素标记的探针RNA可-20℃长期放置一年,同位素标记的探针RNA不能放置。
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