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本抗体用人工合成的含磷酸化Ser536的一段人NF-κB p65多肽作为抗原制备而成的抗Phospho-NF-κB p65(Ser536)兔单克隆抗体。识别Ser536被磷酸化的NF-κB p65，可以检测内源性的Phospho-NF-κBp65(Ser536)，不识别其它位点磷酸化的p65，不识别p50亚基或其它相关蛋白。配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测时的一抗稀释。

NF-κB(nuclear factor κ-light-chain-enhancer of activated B cells)是一种常见的转录因子，可以被炎症因子、生长因子或趋化因子等激活。常见的炎症因子(包括Interleukin-1β、TNF-α和LPS等)都可以激活NF-κB。NF-κB由两类亚基形成同源或异源二聚体。一类亚基包括p65(也称RelA)、RelB和C-Rel；另一类亚基包括p50和p52。最常见的NF-κB亚基组成形式为p65/p50或p65/p65。

NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物，分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下，IκB kinase(IKK)复合物会被NF-κB-inducing kinase磷酸化激活，导致IκB-α会在Ser32和Ser36位点被磷酸化，随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后，其核定位序列暴露，从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。在一些可以激活NF-κB的刺激存在的情况下，一方面IκB-α被IKK磷酸化修饰导致其后续的泛素化降解，另一方面p65转录激活结构域的Ser536也可以被IKK磷酸化修饰，增强其转录活性。

• Western一抗稀释液可-20℃或4℃保存，优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
  
• 对于本抗体，Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜，如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
  
• 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
  
• 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1～3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

• Western检测：
  
  • 按照1:1000用Western一抗稀释液稀释抗体。
    
  • 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
    
  • 回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
    
  • 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
    Western实验步骤及试剂。
• 免疫染色：
  可以使用免疫染色一抗稀释液稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：免疫染色的方法与步骤。
  
• 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。