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Tubulin-Tracker Green是一种Tubulin绿色荧光探针，可以用于培养细胞或组织切片的Tubulin特异性荧光染色。

本Tubulin-Tracker Green探针为荧光染料Alexa Fluor 488标记的抗α-Tubulin小鼠单克隆抗体(克隆号为DM1A)，可以识别α-Tubulin的426-450aa。可以用于人、小鼠、大鼠、牛、猪、豚鼠和禽类(avian)样品α-Tubulin的检测。最大激发波长为495nm，最大发射波长为519nm。Alexa Fluor 488的荧光光谱和FITC非常接近，可以用FITC的检测条件进行检测。

本制品可以用于细胞或组织内的微管(microtubule)的荧光检测。可以用于荧光显微镜观察，也可用于流式细胞仪检测。使用本制品染色细胞内微管的效果请参考图1。

图1.Tubulin-Tracker Green对NRK-52E细胞(大鼠肾小管上皮细胞)的染色效果。图A为明场下大鼠肾小管上皮细胞形态图；红色荧光为Mito-Tracker Red CMXRos染色的线粒体(图B)，绿色荧光为在Mito-Tracker Red CMXRos染色后经固定、通透再使用Tubulin-Tracker Green对微管进行的染色(图C)，图D为Mito-Tracker Red CMXRos、Tubulin-Tracker Green及Hoechst 33342三重染色的叠加图。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本制品使用时的推荐稀释比例为1:50～100，共可以配制2～4mL染色液。如果每个片子需要使用100μL染色工作液，每个包装的本制品足够用于20～40个片子的染色。

组分	规格
Tubulin-Tracker Green	40μL
说明书	1份

保存：-20℃，避光，有效期1年。

• 对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。
  
• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• 需自备盖玻片和载玻片。

• 固定细胞或组织切片的荧光染色：
  
  • 用PBS洗涤细胞或组织切片2次。
    
  • 用免疫染色固定液或PBS配制的3.7%甲醛溶液室温固定细胞或组织切片约10～20分钟。
    
  • 用免疫染色洗涤液或含0.1% Triton X-100的PBS洗涤2～3次，每次5分钟。
    
  • 用免疫荧光染色二抗稀释液或含有1～5% BSA和0.1% Triton X-100的PBS按照1:50～100的比例稀释Tubulin-Tracker Green，例如4μL Tubulin-Tracker Green用0.2mL或0.4mL稀释液稀释，稀释后的溶液即为Tubulin-Tracker Green染色工作液。稀释比例可以根据实际染色效果进行适当调整。
    
  • 把Tubulin-tracker Green染色工作液按照约每个片子100μL的比例滴加到片子上，室温避光孵育30～60分钟。为防止蒸发，孵育时最好将片子置于载玻片染色盒中，载玻片染色盒可以向我司订购。
    
  • 用免疫染色洗涤液或含0.1% Triton X-100的PBS洗涤2～4次，每次5分钟。
    
  • 随后可以直接用荧光显微镜进行观察。也可以用抗荧光淬灭封片液封片后保存和观察。
• 流式细胞仪检测：
  
  • 每个样品收集约20～50万细胞。
    
  • PBS洗涤一次。
    
  • 用免疫染色固定液或PBS配制的3.7%甲醛溶液室温固定细胞约10～20分钟。
    
  • 用免疫染色洗涤液或含0.1% Triton X-100的PBS洗涤2～3次，每次5分钟。
    
  • 用免疫荧光染色二抗稀释液或含有1～5% BSA和0.1% Triton X-100的PBS重悬细胞，然后按照1:50～100的比例加入Tubulin-Tracker Green。例如1μL Tubulin-Tracker Green加入到50～100μL细胞悬液中。Tubulin-Tracker Green稀释比例可以根据实际染色效果进行适当调整。
    
  • 室温避光孵育1小时。
    
  • 用免疫染色洗涤液或含0.1% Triton X-100的PBS洗涤2～3次，每次5分钟。随后即可进行流式细胞仪分析。

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