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D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物，普遍应用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素(底物)能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大、小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式：D-荧光素(游离酸，货号：LA10829)，D-荧光素钠盐(货号：LA10828)，D-荧光素钾盐(货号：LA10826)。主要差别在于溶解特性：D-荧光素游离酸的水溶性以及缓冲体系的溶解性都较弱，除非溶于弱碱如低浓度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO；D-荧光素盐能够易溶于水或缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。根据文献及客户使用习惯，目前使用荧光素钾盐的较为常见。

中文名	荧光素钾盐；D-荧光素钾盐；D-荧光素钾
英文名字	D-Luciferin potassium
CAS号	115144-35-9
分子式	C11H7N2O3S2K
分子量	318.41
结构式：
纯度等级	≥98%,BR
外观	浅黄色固体
溶解性	易溶于水(30mg/mL)
储存条件	-20℃，避光

• 体外生物发光试验荧光素试剂的制备
  
  • 用无菌水(货号：LA10135)制备100×荧光素储液(15mg/ml)，轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
    
  • 将D-荧光素钾盐(货号：LA10826)溶解于预热好的组织培养基中，制备成浓度为150μg/mL的工作液。
    
  • 去除培养细胞的培养基。
    
  • 图像分析前，向细胞培养板中添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。
• 活体成像分析
  
  • 配制溶液
    使用无菌D-PBS(不含Ca²⁺、Mg²⁺，货号：LA10130)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/ml)，0.22μm滤膜过滤除菌(避光)，分装后于-20℃或-80℃冷冻保存，避免反复冻融。使用时4℃融化，实验前平衡至室温(避光)。
    
  • 注射量取决于注射方式，具体如下：
    

    静脉注射(25-27gauge针头)	按10μL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
    腹腔注射(25-27gauge针头)	按10μL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
    肌肉注射(27gauge针头)	50μL，浓度为1～2mg/ml荧光素工作液
    鼻内注射(pipette)	50μL，浓度为3mg/ml荧光素工作液

    
    
  • 注射入体内10～20min(待光信号达到最强稳定平台期)，再进行成像分析。
    注意：建议对每只动物模型都建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。
    如果有条件，对储存液充氮气或氩气(防止氧化)，稳定性和保存时间更长。注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。荧光素钾盐和荧光素钠盐应用上没有差别，两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看，钾盐的使用率远高于钠盐，尤其是体内实验。两者功效相同。