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R-藻红蛋白(R-PE)是从红藻中分离出来的。它的主要光吸收峰在565nm，第二吸收峰在496和545nm处。它的第二类高峰中相对突起的吸收峰，在来自不同种类的R-PEs中有显著性的变化。R-PE由三个亚基组成，α亚基(~20kDa),β亚基(~20kDa)和γ亚基(~30kDa)。

• 将保存在硫酸胺中的PE(5mg，约1.8mL)。充分摇匀后，取0.9mL，12000r/min离心10min，弃上清。将沉淀重悬于0.5mlPBS中。在300MLPBS中室温透析30Min。期间换液俩次。
  
• 调整PE浓度为1.4mg/ml，加入40μL SPDP，浓度1.3mg/ml in甲醇，室温孵育2.5h。
  
• 取纯化CD4抗体200μL(25mg/ml)加入40μL SMCC(1.7mg/ml in DMSO)，室温孵育1h。
  
• 将75μL DTT加到SPDP-PE中，室温孵育30Min。
  
• 用PD-10柱纯化SPDP-PE-DTT和SMCC-CD4单抗，并将其混合，4℃搅拌过夜。
  
• 在过夜的标记混合物种加入NEM 160μL (12.5mg/ml,PBS溶解)终止反应，4℃继续搅拌30min。
  
• 将标记抗体通过S-300柱在AKTA检测下分离纯化，PBS洗脱，收集第一峰。
  
• 收集的标记抗体加入终浓度1%BSA，0.1%防腐剂，1mmol/L碘乙酰胺，0.1mmol/L EDTA，4℃保存。

• 巯基化藻红蛋白(PE)的制备；
  
  • 将600μL浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2mL浓度为3.6mg/ml的PE中；
    
  • 将以上混合液和1.2mL pH6.8的PB混合，而后装入透析袋置入50mmol/L pH6.8的PB中于4℃透析，过夜；
    
  • 再换用pH7.5 PB透析6h。每个PE分子中可结合8个巯基；
• 巯基PE-IgG的制备；
  
  • 将30μL浓度为1.1mg/ml的异双功能试剂SPDP的乙醇溶液，加入到700μL的4.2mg/ml IgG PB溶液(50mmol/L pH7.5)，在室温中反应2.5h；
    
  • 再将400μL浓度为1.7mg/ml的巯基化PE加到500μL反应混合液中，室温反应12h；
    
  • 加入50mmol/L的碘乙酸钠100μL来封闭残余巯基，于4℃下用PB透析过夜；
    
  • 最后加入0.01%的Na3 N3后分装，于4℃保存半年。

• 称取4.08mg PE溶于1mL浓度为0.1mmol/ml pH7.4的PBS中，溶解后，取出0.5mL，再加入浓度为2.65mg/ml的SPDP无水甲醇液10μL，SPDP/蛋白质物质的量比为10，22℃反应5min，过Sephadex G-50(1×17cm)，用100mmol/L pH7.4的PBS平衡和洗脱；
  
• 将0.5mL浓度为2mg/ml的蛋白质和100mmol/L pH7.4的PBS液混合，把2.6μL上述SPDP甲醇液加入混合液中，使得SPDP:蛋白质=9:5，于22℃下放置40min后，再加如25μL pH7.4的二硫苏糖醇(DTT)缓冲液，于22℃下反应25min后，过Sephadex G-50，收集蛋白A峰；
  
• 将0.77mg/ml的PE和0.27mg/ml Protein A等量混合，于22℃下反应6h后，将混合物于4℃保存备用；
  
• 将以上两种PE标记制品溶于0.01mol/L pH7.4 PB(含有0.1mol/L DETA、1mol/L碘乙酰胺、1%BSA和0.1% NaN3)中，于0～4℃保存。