注射用腔肠素h

产品货号：

KM0096

中文名称：

注射用腔肠素h

英文名称：

Injectable h-Coelenterazine

产品规格：

2×500μg|20×500μg

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本制品为专供体内成像研究的注射用腔肠素h(Injectable h-Coelenterazine)，不仅含有超纯的腔肠素h(＞99%)，还提供特别设计的Inject-Diluent溶剂，能够最大程度的溶解腔肠素h，从而最小化体内注射体积。另外，与传统乙醇溶解的腔肠素h相比，用Inject-Diluent溶解的腔肠素h能得到更好的荧光信号。

腔肠素h(Coelenterazine h，CTZ-h)是天然腔肠素(CTZ-native)的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上(最大发射波长~466nm，半衰期为0.6～1.2sec)。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶的底物，适用于体内外报告基因分析。

腔肠素(Coelenterazine)是在水生生物中发现的一种发光基团(luminophore)，是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase,Rluc)，分泌型膜锚定荧光素酶(Gaussia luciferase,Gluc)和薮枝虫荧光素酶(Obelia luciferase)，和发光蛋白包括水母发光蛋白(Aequorin)的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450～480nm【见图1】。而甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶(FLuc)系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg²⁺的存在才能同时发光，光波长在550～570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：

活细胞或组织的钙离子检测；
细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子(活性氧，ROS)化学发光检测；
基因报告基因检测；
动物活体检测；
ELISA和生物发光共振能量转移(BRET)用于蛋白相互作用研究；
药物高通量筛选(HTS)。

图1．海肾荧光素酶(Rluc)催腔肠素发光的反应流程。

产品组成

组分	2×500μg	20×500μg
注射用腔肠素h	2×500μg	20×500μg
Inject-Diluent	500μL	10×500μL

保存：-20℃，干燥避光，且保存于惰性气体内，有效期1年。

注意事项

本品特别开发适用于体内实验。若仅做体外实验，可使用我司提供的天然腔肠素(货号：KM0051)或腔肠素h(货号：KM0095)。
发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h(CTZ-h)适合用作海肾荧光素酶(Rluc)的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)的底物。天然腔肠素(CTZ-native)是唯一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。
商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物(比如腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp)。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用装有23 gauge或更小针头的0.5～1.0mL注射器，吸取150μL温热(35～50℃)的Inject-Diluent。
将150μL Inject-Diluent打入Native Coelenterazine瓶内，使用针头和注射器上下吸打或低速涡旋，直至看到完全透明溶液，此时得到腔肠素溶液浓度为3.33mg/mL。如果溶液没有完全透明，用水浴锅或加热板在60～80℃加热几分钟，检查完全透明。
按下表1，用胰岛素注射器吸取15～75μL充分溶解的腔肠素h溶液(3.33mg/mL)，通过尾静脉注射到动物体内。检查，排气，冲洗针头。使用胰岛素注射器的优势在于很低的液体滞留体积(＜2μL)。缓慢注射。
表1．建议按照表1单只小鼠(25g体重)的腔肠素h溶液(3.33mg/mL)注射剂量表
需要的底物质量腔肠素h溶液注射体积
50μg 15μL
100μg 30μL
200μg 60μL
250μg 75μL

附录1：天然腔肠素及其衍生物的光谱特性

产品名称	货号	Em(nm)	RLC1^①	Relative Intensity^②	Half-rise time(ms)^③
天然腔肠素	KM0051	466	1	1	6-30
腔肠素h	KM0097	466	0.75	16	6-30
腔肠素400 a	KM0094	400	/	/	/
腔肠素hcp	KM0091	445	0.65	500	2-5
腔肠素cp	KM0090	442	0.63	28	2-5
腔肠素f	KM0092	472	0.8	20	6-30
腔肠素n	KM0089	468	0.25	0.15	6-30
腔肠素e	KM0093	405?& 465	0.5	4	0.15-0.3

①RLC = relative luminescence capacity:Total time-integrated emission of aequorin in saturating Ca2+relative to native aequorin = 1.0.
②Ratio of the luminescence of aequorin reconstituted with coelenterazine analog relative to native aequorin at 100 nM Ca²⁺.
③Half-Rise Time:The half-rise time is the time for the luminescence signal to reach 50%of the maximum after addition of 1mMCa2+to a standard of aequorin reconstituted with the coelenterazine analog of interest.

附录2：天然腔肠素及其衍生物的应用差异

产品名称	货号	应用特征
天然腔肠素	KM0051	应用非常广泛的标准底物。腔肠素是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶的底物。底物的快速再生比较重要的实验推荐使用天然腔肠素。 1)生物发光检测钙离子的灵敏度非常高，检测范围从0.1μM到＞100μM； 2)使用腔肠素监测报告基因表达是其主要应用； 3)其他应用包括生物共振能量转移BRET，化学发光检测细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)。
腔肠素h	KM0097	1)腔肠素h形成的水母发光蛋白复合物比天然腔肠素复合物的光强度高10倍以上； 2)比天然腔肠素对钙离子敏感度更高； 3)也适用报告基因分析。
腔肠素400a	KM0094	也称为DeepBlue C，是一种腔肠素衍生物，用作海肾荧光素酶Rluc的底物，发射峰约400nm。含GFP受体的BRET研究是Rluc的首选底物，因其对GFP受体的发射波干扰非常小。不可用作Gluc底物。
腔肠素hcp	KM0091	其生物发光强度最高(腔肠素hcp形成水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍)，对Ca²⁺反应速度快。
腔肠素cp	KM0090	腔肠素cp产生水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的15倍，且具有更快的Ca²⁺反应性。
腔肠素f	KM0092	腔肠素f形成的水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的20倍，最大发射波长约长8nm。具有最好的细胞渗透性。当需要具极高钙离子Ca²⁺灵敏度的水母发光蛋白复合物，建议用腔肠素f。
腔肠素n	KM0089	所有的腔肠素衍生物中荧光强度最弱，对Ca²⁺反应时间明显慢于天然腔肠素。一种非常有用的低灵敏腔肠素。
腔肠素e	KM0093	体外水母发光蛋白再生中腔肠素e的速度最高，具有双发射峰，分别为405nm和465nm，使其能在pCa 5～7范围内通过双发射峰荧光强度比率的方式测定Ca²⁺浓度，提高检测准确度。但由于渗透性差，不适合胞内应用。在溶液中稳定性差。

需要的底物质量	腔肠素h溶液注射体积
50μg	15μL
100μg	30μL
200μg	60μL
250μg	75μL

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