产品货号：
KM0069
中文名称：
5-马来酰亚胺荧光素(巯基染料)
英文名称：
Fluorescein-5-maleimide
产品规格：
25mg
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
荧光素-5-马来酰亚胺是一种活化的荧光分子（Ex/Em=494/518nm），能非常容易的将荧光素连接到蛋白上。马来酰亚胺基团在pH 7的最佳体系内与半胱氨酸侧链上的巯基基团反应，形成一稳定的硫醚键。马来酰亚胺基团在pH 7时与游离巯基反应活性比胺基强~1000倍。而在pH＞7.5与伯胺的反应活性提高，且会发生马来酰亚胺基团水解现象。荧光素-5-马来酰亚胺能用来标记蛋白，用于检测构象变化，多亚基复合物的组装和配基结合过程。
主要参数：
CAS NO：75350-46-8
分子式：C24H13NO7
分子量：427.37
纯度：＞97%
Ex/Em：494/518nm
外观：浅橘色至深橘色和浅红色至深红色粉末
溶解性：溶于DMSO、DMF
反应基团：马来酰亚胺，与巯基反应（pH 6.5-7.5）
结构式：
保存：-20℃避光干燥保存，2年有效。
注意事项：
1．马来酰亚胺对湿度很敏感。需将本品保存在-20℃，保持干燥。开盖前一定要将本品放到室温回温，以避免产品受潮而凝结成团。
2．使用前才配制试剂。不可将试剂保存在水溶液内。
3．用荧光素-5-马来酰亚胺标记的分子必须含有游离的巯基（-SH）。某些含巯基分子在溶液中可能被氧化，形成二硫键，从而不能与马来酰亚胺反应。二硫键可被还原生成游离巯基。还原后，大部分的还原剂必须在偶联反应前去除。
4．偶联反应体系内不要引入含巯基组分，因其会与马来酰亚胺反应，进而抑制和降低目的分子的连接率。
5．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
标记方法：
仅做参考,需根据具体应用来优化以下标记步骤。
一、标记蛋白
1．于20mM磷酸钠缓冲液，150mM NaCl，pH 7.2或其他适合的缓冲液（pH 6.5-7.5）内准备含巯基样品。为了预防金属催化生成二硫键，体系内加入终浓度5-10mM的EDTA。
2．往样品内加入摩尔量远高的荧光素-5-马来酰亚胺。通常情况，使用25倍高的摩尔比能得到理想结果。
注意：荧光素-5-马来酰亚胺能直接加入水溶性溶液（高达1mM浓度）或首先溶解在DMF（10mM）在加入蛋白溶液中。
3．进行偶联反应，室温2h或4℃过夜。
4．用截留分子量（MWCO）为10kD的脱盐柱或透析袋来去除未结合的荧光素。
5．将偶联好的蛋白或多肽避光保存在4℃，稳定保存高达一个月。或按照单次用量分装，保存在-20℃。
二、计算标记效率
为了得到最佳的结果和精确测定标记率（F/P值），需完全去除未反应的荧光素。有必要稀释少量脱盐或透析样本。
1．使用1cm比色皿，测定标记蛋白在280nm和495nm处的吸光值。
2．计算蛋白浓度。
ε=蛋白摩尔吸光系数（比如，IgG的摩尔吸光系数~210,000M-1cm-1）
Amax=A495
CF=校正系数=A280/Amax=0.3000
×稀释倍数
3．计算标记效率
ε′=荧光素摩尔吸光系数：68,000M-1cm-1
摩尔荧光素/摩尔蛋白= ×稀释倍数
相关搜索：5-马来酰亚胺荧光素(巯基染料)，荧光素-5-马来酰亚胺，Fluorescein-5-maleimide，75350-46-8
主要参数：
CAS NO：75350-46-8
分子式：C24H13NO7
分子量：427.37
纯度：＞97%
Ex/Em：494/518nm
外观：浅橘色至深橘色和浅红色至深红色粉末
溶解性：溶于DMSO、DMF
反应基团：马来酰亚胺，与巯基反应（pH 6.5-7.5）
结构式：
保存：-20℃避光干燥保存，2年有效。
注意事项：
1．马来酰亚胺对湿度很敏感。需将本品保存在-20℃，保持干燥。开盖前一定要将本品放到室温回温，以避免产品受潮而凝结成团。
2．使用前才配制试剂。不可将试剂保存在水溶液内。
3．用荧光素-5-马来酰亚胺标记的分子必须含有游离的巯基（-SH）。某些含巯基分子在溶液中可能被氧化，形成二硫键，从而不能与马来酰亚胺反应。二硫键可被还原生成游离巯基。还原后，大部分的还原剂必须在偶联反应前去除。
4．偶联反应体系内不要引入含巯基组分，因其会与马来酰亚胺反应，进而抑制和降低目的分子的连接率。
5．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
标记方法：
仅做参考,需根据具体应用来优化以下标记步骤。
一、标记蛋白
1．于20mM磷酸钠缓冲液，150mM NaCl，pH 7.2或其他适合的缓冲液（pH 6.5-7.5）内准备含巯基样品。为了预防金属催化生成二硫键，体系内加入终浓度5-10mM的EDTA。
2．往样品内加入摩尔量远高的荧光素-5-马来酰亚胺。通常情况，使用25倍高的摩尔比能得到理想结果。
注意：荧光素-5-马来酰亚胺能直接加入水溶性溶液（高达1mM浓度）或首先溶解在DMF（10mM）在加入蛋白溶液中。
3．进行偶联反应，室温2h或4℃过夜。
4．用截留分子量（MWCO）为10kD的脱盐柱或透析袋来去除未结合的荧光素。
5．将偶联好的蛋白或多肽避光保存在4℃，稳定保存高达一个月。或按照单次用量分装，保存在-20℃。
二、计算标记效率
为了得到最佳的结果和精确测定标记率（F/P值），需完全去除未反应的荧光素。有必要稀释少量脱盐或透析样本。
1．使用1cm比色皿，测定标记蛋白在280nm和495nm处的吸光值。
2．计算蛋白浓度。
ε=蛋白摩尔吸光系数（比如，IgG的摩尔吸光系数~210,000M-1cm-1）
Amax=A495
CF=校正系数=A280/Amax=0.3000
×稀释倍数
3．计算标记效率
ε′=荧光素摩尔吸光系数：68,000M-1cm-1
摩尔荧光素/摩尔蛋白= ×稀释倍数
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