产品目录

本制品是浓度为1mg/mL的DAPI储存液。使用时根据实验应用直接将储存液用相应溶液稀释到工作浓度即可。推荐工作浓度通常为0.5～10μg/mL，用于固定的细胞和组织的细胞核染色。

DAPI是一种蓝色荧光染料，选择性结合双链DNA的小沟区（优先结合AT富集的DNA）形成稳定的复合物，产生比DAPI约强20倍的荧光。DAPI的最大激发/发射波长为340/488nm，DAPI-DNA复合物的最大激发/发射波长为364/454nm，通常用作荧光显微术、流式细胞术和染色体染色的细胞核复染剂。由于对DNA的高亲和性，DAPI还常常被用在细胞计数、凋亡检测、支原体污染检测、基于DNA内含物的细胞分选，以及高内涵成像分析中的核分割工具。虽然高浓度情况下DAPI能够进入活细胞，但DAPI不具细胞膜渗透性，通常情况用来染固定细胞。对于活细胞染色，细胞核蓝色荧光探针(Hoechst33342)是一种受欢迎的具细胞膜渗透性的核复染剂。

• DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
  
• DAPI储存液（1mg/mL）置于-20℃避光保存，1年稳定。稀释的工作液（1～5μg/mL），置于+4℃，6个月稳定。
  
• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
  
• 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 工作液配制
  用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5～10μg/mL）。
  
• 固定的细胞或组织染色
  
  • 对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。
    
  • 如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI染色。
  • 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量DAPI染色液，覆盖住样品即可。
    对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3～5min。
    
  • 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2～3次，每次3～5min。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=364/454nm。

• DAPI是一种好的活细胞核标记探针？
  DAPI被认为是一种半渗透性/无渗透性的细胞核染料。对细胞核的染色性能好坏依赖于细胞系类型。某些细胞系可用DAPI染色，某些完全不可以，而某些标记结果不一致。替代的话，建议用即用型Hoechst33342染色液或即用型Hoechst33258染色液，具有同DAPI一样的波长和核酸结合模式，但是有非常好的细胞膜渗透性。
  
• DAPI和Hoechst染料相当类似，如何二选一？
  DAPI是非常通用的蓝色荧光染料，用于细胞核复染。对固定和透化的细胞/组织，具有非常明亮的细胞核标记。然而，此染料被认为是半渗透至不渗透的染料，用于活细胞染色的结合不一致。Hoechst 33342是一种细胞膜渗透性的染料，具有同DAPI的结合机制和荧光特征。非常适合用于活细胞成像，效果就如同DAPI用于固定细胞染色。
  
• 有学者发现，先进行EdU插入的点击反应后再用DAPI染细胞，比未进行点击反应直接用DAPI染色的信号低，是什么原因导致的？
  点击反应内的铜离子在很少程度上会变性DNA（虽然变性程度没有BrdU检测那么多），导致DNA染料（包括DAPI和Hoechst染料）的结合能力受到影响。这部分影响仅在经典的EdU试剂盒内表现明显，而对于第二代的EdU试剂盒（使用相对更低浓度的铜离子）基本无影响。