产品货号:
KD3119
中文名称:
SYBR Green I(10000×)
英文名称:
SYBR Green I(10000×)
产品规格:
50μL
发货周期:
1~3天
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产品描述:
SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单,无须脱色或冲洗:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25~100倍。SYBR Green I与ds DNA结合荧光信号会增强800~1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低,可用于多种电泳分析
SYBR Green I适用于多种凝胶电泳法:琼脂糖凝胶,丙烯酰胺凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等
SYBR Green I与双链DNA亲和力非常高,可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq酶,逆转录酶,内切酶,T4连接酶等)没有抑制作用:另外,SYBR Green I与EB相比,诱变能力大大降低
电泳用SYBR Green I使用方法简介:
SYBR Green I预染色方法
1、该方法适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
2、工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR Green I稀释100倍,即为SYBR GreenI工作液。SYBR Green I工作液可以置2~8℃冷藏一个月以上
3、制胶:按常规方法制胶,不含任何染料
4、样品染色:向分析样品中加入SYBR Green I工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR Green I与样品中的DNA充分结合。SYBR Green I工作液加入量应为总上样量的1/10
5、DNA marker染色:5μL DNA marker和5μL DNA marker稀释液和1μL SYBR Green I工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR Green I与DNA充分结合
6、上样,电泳:按常规操作
SYBR Green I后染方法
1、按照常规方法进行电泳
2、用PH 7.0~8.5的缓冲液(如TAE,TBE或者TE),按照10000:1的比例稀释SYBR GreenI浓缩液,混匀,制成染色溶液
3、将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温震荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻倒在胶板上,让工作液均匀的覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)
荧光定量PCR用SYBR Green I使用方法简介
SYBR Green I与dsDNA结合荧光信号可增强800~1000倍。在PCR反应体系中,加入过量的SYBR Green I荧光染料,SYBR荧光染料特异性的掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增强与PCR产物增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定
使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I荧光定量PCR试验成功有很多因素,但是SYBR Green I得使用浓度是非常关键的因素,如果SYBR Green I浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度,反应终浓度为1×-0.2×之间。
镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时,镁离子浓度要比SYBR Green I的普通PCR反应要高出0.5~3Mm
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