产品货号：
KD2075
中文名称：
质谱兼容型蛋白银染试剂盒
英文名称：
Mass Spectrometric Compatible Protein Silver Stain Kit
产品规格：
10T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
保存：RT
储存条件：4℃保存，保质期2年。
产品内容：
实验准备：(每个溶液均需要新鲜配置)
1.固定液：400mL/次。自备。
160mL甲醇40mL乙酸200mL去离子水
2.浸泡液A：200mL/次。
60mL甲醇8mL A液一瓶A干粉(每次一瓶)132mL去离子水
3.染色液B：200mL/次。
1mL B液(染色浓缩液，200×)199mL去离子水
4.显色液C：200mL/次。
1瓶C干粉(每次一瓶)200mL去离子水160μL的C液(临用前加)
5.终止液D：200mL/次。
1瓶D干粉(每次1瓶)200mL去离子水
银染步骤：
1.PAGE电泳(包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等)结束后，将PAGE胶转移到装有200mL固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分(如甘氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等)，倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。
2.重复上步一次。
3.将PAGE胶转移到200mL浸泡液A中，室温摇晃30分钟。
4.用200mL去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
5.将PAGE胶转移到200mL的染色液B中，室温摇晃20分钟。
6.用200mL去离子水漂洗2次，每次1分钟(不要延长或缩短)。
7.将PAGE胶转移到200mL的显色液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。
8.将PAGE胶转移到200mL终止液D中，室温摇晃终止反应。
9.用200mL去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
10.切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析(略)。
MS前处理步骤(仅供参考)：
1.脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液(30mM K3Fe(CN)3和100mM Na2S2O3的1：1的混合液)处理直到黑色消失。
2.还原：将胶块或胶条置于10mM DTT(溶剂为50mM NH4HCO3)，56℃处理一小时。
3.烷化：将胶块或胶条置于55mM碘乙酰胺(溶剂为50mM NH4HCO3)，室温避光处理45分钟。
4.原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10ng/uL测序级别的trypsin溶液中(溶剂为25mM NH4HCO3)，37℃处理过夜。
5.多肽提取：用5%三氟乙酸抽提酶解液，再用2.5%三氟乙酸-50%ACN混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀(多肽)最后溶于0.5%三氟乙酸中。
6.MS分析：参考相关MS仪器使用手册。
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