产品货号:
KD1584
中文名称:
细胞膜绿色荧光探针DiO保存液
英文名称:
DiO perchlorate Storage Solution
产品规格:
1mL|5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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DiD、DiO、DiI、DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,这类染料在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显:DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiO被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。DiO通常不会明显影响细胞的生存力(viability)。
组分 | 1mL | 5mL |
细胞膜绿色荧光探针DiO保存液 | 1mL | 5mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:-20℃,干燥避光
- DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI,有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。
- 对于固定的细胞或组织,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
- 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
- 染色缓冲液经过过滤除菌处理,在使用时须注意避免微生物污染,否则很可能严重影响染色效果。如果染色缓冲液发生浑浊等明显的微生物污染,不能继续使用。
- 如果染色时间过长或染色后细胞继续培养,探针也可能进入细胞内而染色其它细胞器的膜。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 细胞膜染色液制备
工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为50~200μM的工作液。- 工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的两倍以上寻找最佳条件。
- 悬浮细胞染色
- 加入适当体积的细胞膜染色工作液重悬细胞,使其密度为1~2×106/mL左右。
- 37℃避光孵育细胞5~20min,不同的细胞最佳孵育时间不同。以5min作为初始孵育时间,根据实际所用的细胞优化染色时间,以得到最佳的荧光染色效果。
- 500~1000×g室温离心5min。
- 吸除上清液,再次缓慢加入37℃预热的细胞培养液重悬细胞。
- 重复c、d步骤两次。
- 流式细胞仪检测,或将细胞转移至多孔板、细胞培养皿或者细胞爬片上,在荧光显微镜下观察。DiO的最大激发光波长为484nm,最大发射光波长为501nm。
- 加入适当体积的细胞膜染色工作液重悬细胞,使其密度为1~2×106/mL左右。
- 贴壁细胞的染色
- 将贴壁细胞种于细胞培养皿、多孔细胞培养板或者细胞爬片上,置于无菌实验室培养。
- 吸除细胞培养液,用PBS洗涤细胞2遍。
- 加入适当体积的细胞膜染色工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
- 37℃避光孵育细胞5~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。以5min作为初始孵育时间,根据实际所用的细胞优化染色时间,以得到最佳的荧光染色效果。
- 吸除细胞膜染色工作液,用PBS洗涤2~3次,然后加入37℃预热的细胞培养液即可在荧光显微镜下观察。DiO的最大激发光波长为484nm,最大发射光波长为501nm。
- 将贴壁细胞种于细胞培养皿、多孔细胞培养板或者细胞爬片上,置于无菌实验室培养。
- 显微镜检测
- DiD、DiO、DiI、DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
- 多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:
① DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
② DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
③ DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005
- DiD、DiO、DiI、DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
- 流式细胞仪的检测
DiD、DiO、DiI、DiR染色的细胞可以分别用经典的FL1、FL2、FL3和FL4流式细胞仪检测。
表1.细胞膜荧光染料对应波长与推荐滤光器:货号 产品名称 Ex/Em 推荐滤光器* KD1454 DiD Perchlorate 644/663nm XF47-Omega,31023-Chroma KD1357 DiI perchlorate 549/565nm XF32-Omega,31002-Chroma KD2109 DiO perchlorate 484/501nm XF23-Omega,31001-Chroma KD1448 DiR iodide** 748/780nm XF112-Omega,41009-Chroma - * Omega滤光器由Omega公司提供;Chroma滤光器由Chroma公司提供。
- **DiR的发射波长肉眼不可见,所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器
- * Omega滤光器由Omega公司提供;Chroma滤光器由Chroma公司提供。
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