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分子式：C63H101IN2
分子量：1013.39
保存：-20℃

储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
产品描述
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI(橙色荧光)，DiO(绿色荧光)，DiD(红色荧光)和DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用633nm He–Ne激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。
使用方法
1.细胞膜染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。
注意：未使用的储存液保存在-20℃，避免反复冻融。
(2)工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5μM的工作液。
注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
2.悬浮细胞染色
(1)悬浮细胞密度为1×106/mL加入到工作液中。
(2)在37℃培养细胞2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(3)染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
(4)倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
(5)重复(3)，(4)步骤两次以上。
3.粘壁细胞的染色
(1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)在37℃培养细胞2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(5)吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。
4.显微镜检测
(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
(2)多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
5.流式细胞仪的检测
DiD，DiO，DiI，DiR染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。
细胞膜荧光染料对应波长与推荐滤光器：
* Omega滤光器由Omega公司提供(www.omegafilters.com)；Chroma滤光器由Chroma公司提供(www.chroma.com)。
**DiR的发射波长肉眼不可见，所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器。
相关搜索：DiR(细胞膜深红色荧光探针)，DiR Iodide