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本制品是由高质量的链霉亲和素(Streptavidin)与高度交联的6%琼脂糖共价偶联而成，能够快速、高效、灵敏、特异性地与生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化生物素标记的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等，用于免疫沉淀(IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。

Streptavidin的分子量为55kD，可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数为Kd =10^-15M。Streptavidin是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素，从Streptomyces adidinii中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin (亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。Avidin的pI =～10.5，在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。

链霉亲和素琼脂糖凝胶在生物医药领域内应用非常广泛，可以特异性地结合生物素标记的抗原或者抗体，作为免疫沉淀、细胞分选、ELISA等反应的载体；结合生物素标记的DNA或RNA片段，从细胞或组织提取物中分离特定的核酸-蛋白质复合物，用于蛋白质与核酸相互作用研究；结合生物素标记核酸探针，用于DNA、RNA杂交实验或mRNA的分离和纯化等；还可用于纯化单链生物素标记DNA寡核苷酸、分离生物素标记PCR产物等。本制品的实验流程参考图1。

产品内容	50%沉淀凝胶在特定的保护缓冲液
琼脂糖结构	6%交联琼脂糖
平均粒径	45～165μm
偶联蛋白	链霉亲和素(Streptavidin)
蛋白分子量	~55kDa(Streptavidin)
蛋白浓度	≥2mg/mL
结合能力	≥1mg生物素化抗体或dsDNA/mL； ≥200nmol游离生物素/mL； ≥8nmol生物素化寡核苷酸或多肽/mL
特异性	生物素化配体
洗脱方法	用酸或SDS-PAGE上样缓冲液进行一次性洗脱
应用	生物素标记蛋白和核酸的纯化，IP,Co-IP,DNA-蛋白相互作用

• 结合量容量高：与同类的很多产品相比，本制品具有非常高的结合容量，对复杂样品中生物素标记的分子可以快速进行分离纯化。本制品中Streptavidin Agarose为50%的凝胶悬浊液，每毫升 Streptavidin Agarose沉淀中偶联有≥2mg高质量链霉亲和素蛋白，可结合约1～3mg生物素标记BSA，可高效地进行免疫沉淀等实验。
  
• 特异性强：本制品可特异性地结合生物素化的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等配体分子，获得的产物纯度高，可进一步用于Western、ELISA、Northern、qPCR、质谱分析等一系列后续的分析测试。

组分	1mL	5mL	20mL
链霉亲和素琼脂糖凝胶	1mL	5mL	20mL
说明书	1份

保存：-20℃，有效期1年。


本制品为50%凝胶悬液，包装体积为总体积，每毫升 本制品中共含有0.5mL凝胶沉淀物。如果每个用品使用50μL琼脂糖凝胶悬液，每毫升 本制品可以用于20个样品反应。



图1.链霉亲和素琼脂糖凝胶(Streptavidin Agarose)的实验流程图。



图2.链霉亲和素琼脂糖凝胶(Streptavidin Agarose)用于生物素标记BSA的结合效果图。泳道1为Input，即为生物素标记BSA (Biotin-BSA)；泳道2为同类产品结合的Biotin-BSA；泳道3为本制品结合Biotin-BSA。结合后使用×SDS-PAGE Loading Buffer进行洗脱并进行SDS-PAGE。图中可见本制品能沉淀比竞品更多的Biotin-BSA，结合量接近总量(Input)，并且本制品中偶联了更多的Streptavidin。图中约13kD处的条带为Streptavidin的单体。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

• 本制品含有微量的防腐剂，使用前宜先用TBS等适当溶液洗涤凝胶3次，以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
  
• 在免疫沉淀或纯化时，建议设计阳性和阴性对照组。
  
• 待结合分子的类型、大小及生物素标记方式和程度等都会影响结合效率，建议通过稀释法来确定每种具体应用的琼脂糖凝胶用量，同时可以考虑加大琼脂糖凝胶用量至待结合分子2～3倍摩尔数量以确保结合充分。
  
• 游离生物素会降低本琼脂糖凝胶的结合能力，因此在生物素标记蛋白或核酸后，需要用脱盐柱等方法去除多余的游离生物素。
  
• 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如通用型蛋白酶抑制剂混合物、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(通用型，质谱兼容)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用)等。
  
• 如果离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。酸性溶液洗脱或使用SDS-PAGE洗脱后的琼脂糖不可重复使用。为了尽量减少链霉亲和素的脱落，无论是手动操作还是自动操作，低pH洗脱步骤都不要超过10分钟。
  
• 高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本制品与配体的结合可能有一定影响，但WB及IP细胞裂解液、RIPA裂解液(货号：YT609、YT610、YT611)或NP-40裂解液等都完全适用。

• 缓冲液的准备
  参考下表，根据具体的实验用途配制相应的缓冲液。
  

  缓冲液	成分	应用
  TBS	Tris Buffered Saline (e.g.ST661/ST665)	Prewash
  2×Binding &Washing Buffer I	10mM Tris-HCl (pH7.5),1mM EDTA,2M NaCl,0.01%～0.1% Tween-20	for nucleic acid
  1×Washing Buffer II	PBS (pH7.4),0.05% Tween-20,with or without 0.01%～0.1% BSA	for antibody/protein
  DNA/RNA Elution Buffer	95% formamide,10mM EDTA,pH8.2	for nucleic acid
  Acid Elution Buffer	0.1M Glycine (pH2.8) or 8M Guanidine·HCl (pH1.5)	for antibody/protein
  Neutralization solution	1M Tris-HCl (pH8.5～9.5)	for antibody/protein
  SDS-PAGE Loading Buffer	SDS-PAGE Loading Buffer (e.g.YT620)	for antibody/protein

  • 可根据所结合分子的类型或实验需要，适当调整缓冲液的盐浓度及pH。
    
  • 2×Binding & Washing Buffer I用于洗涤时须用等体积超纯水稀释至1×。
• 链霉亲和素琼脂糖凝胶准备
  
  • 取琼脂糖凝胶并去除上清。轻轻重悬链霉亲和素琼脂糖凝胶，尽量形成均匀的凝胶悬浊液，取20～100μL置于1.5mL离心管(货号：YTB8001)中待用。
    
    • 使用大孔径吸头(如用剪刀剪去部分吸头)吸取凝胶悬浊液会比较方便。
  • 洗涤琼脂糖凝胶。加入1×TBS(货号：YTB1280、YTB1282)至最终体积为约0.5mL，轻轻重悬链霉亲和素琼脂糖凝胶。600×g在4℃离心5分钟，小心去除上清，不要吸到凝胶，完成一次洗涤步骤。然后再按照前述洗涤步骤，洗涤2次。最终去除上清，并根据后续的实验目的，用适量的适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬链霉亲和素琼脂糖凝胶。
    
  • 本琼脂糖凝胶及溶液并非RNase-free处理，如果用于RNA相关的应用，在上述洗涤后，用0.5mL DEPC处理过的0.05M NaCl洗涤琼脂糖凝胶2次，每次2分钟；然后再用0.5mL DEPC处理过的0.1M NaCl洗涤一次。根据后续的实验目的，按照初始体积的量，用适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬链霉亲和素琼脂糖凝胶。
    • 通常，每个样品的琼脂糖凝胶用量约为20～100μL。具体可根据生物素标记分子的多少，参考产品主要指标表中琼脂糖凝胶的“Binding capacity”，计算生物素标记分子的加入量。根据不同的实验目的，例如可以考虑生物素标记分子的加入量为琼脂糖凝胶载量的1～2倍，使琼脂糖凝胶饱和，即把琼脂糖凝胶充分利用，此时通常实验目的是分离纯化；再例如加入琼脂糖凝胶的载量是待分离纯化的生物素标记分子的2～3倍，以确保生物素标记分子能被充分分离纯化，此时通常实验目的是为了对样品中的生物素标记分子进行定量分析。
      
    • 多个样品时，可以取总琼脂糖凝胶量合并洗涤处理后再平分到各个样品管中，洗涤液用量须相应增加。
      
    • 也可参考相关方法进行填柱并使用重力柱法或FPLC法进行纯化。
• 生物素标记核酸的结合和洗脱
  
  • 琼脂糖凝胶重悬：接步骤2b或2c，用2倍原始琼脂糖凝胶体积的2×Binding & Washing Buffer I重悬琼脂糖凝胶。
    
  • 核酸吸附：加入等体积的用超纯水配制的生物素标记核酸样品(加入样品后体积为原始琼脂糖凝胶体积的4倍)，充分振荡混悬，置于旋转混合仪上，室温孵育10～30分钟或4℃孵育2小时。
    
    • 可通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到琼脂糖凝胶上的核酸量。
  • 洗涤：取1mL 1×Binding & Washing Buffer I加入琼脂糖凝胶中，轻轻重悬琼脂糖凝胶，600×g在4℃离心5分钟，去除上清，不要吸到凝胶。再重复洗涤1～2次。
    
  • 洗脱：加入100μL或适量的DNA/RNA Elution Buffer，65℃孵育5分钟或90℃孵育2分钟。
• 生物素标记抗体或蛋白的结合和洗脱
  
  • 抗体或蛋白吸附：加入适量用1×Washing Buffer II稀释的生物素标记抗体、蛋白、抗原抗体复合物或蛋白复合物，轻轻重悬琼脂糖凝胶，置于旋转混合仪上，室温孵育30～60分钟或4℃孵育4～16小时。
    
  • 洗涤：取1mL的1×Washing Buffer II加入琼脂糖凝胶，轻轻重悬琼脂糖凝胶，600×g在4℃离心5分钟，去除上清，不要吸到凝胶。重复洗涤3～4次。
    
  • 洗脱：根据目的核酸或蛋白的特点及后续实验要求，可以选择如下方法之一或其它合适方法进行洗脱。
    
    • 酸性洗脱缓冲液洗脱：每个样品加入100μL或适量Acid Elution Buffer (0.1M Glycine,pH2.8)，混匀后置于旋转混合仪上，室温孵育5分钟，置于离心机中600×g在4℃离心5分钟，将上清转移到新的离心管中，立即加入10μL中和液(1M Tris-HCl,pH8.5)，适当混匀。洗脱液置于4℃待用，或者-20℃长期保存。
      
      • 如果选择酸性洗脱缓冲液进行洗脱，就有可能发生链霉亲和素脱落，需注意孵育时间不要超过10分钟。
        
      • 酸性洗脱缓冲液能破坏绝大部分的抗体与抗原的相互作用。但为了确保更好的洗脱效果，可预先用300μL 0.1% Tween-20的水溶液洗涤琼脂糖凝胶1次。如果对洗脱效率的要求比较高，可用酸性洗脱液(8M Guanidine·HCl,pH1.5)进行洗脱，相应的中和液的pH值或量也要进行一定的调整，例如100μL酸性洗脱液(8M Guanidine·HCl,pH1.5)和15μL中和液(1M Tris-HCl,pH9.5)。
    • SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS洗脱：每个样品加入100μL或适量的1×SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS，95℃加热3分钟。置于离心机中600×g在4℃离心5分钟，取上清用于SDS-PAGE电泳或Western检测等。
      • 如果选择SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS进行洗脱，那么洗脱液将包含链霉亲和素单体和二聚体、生物素标记抗体或蛋白。

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