本制品可以用于生物素标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等。
本制品用高纯度的Streptavidin和超纯的碱性磷酸酯酶交联而成,确保产生极低的本底和非常高的灵敏度。本制品的浓度为1mg/mL。
本制品用于各种常规用途的推荐稀释比例参考下表,实际实验操作过程中需根据具体情况适当调节碱性磷酸酯酶标记Streptavidin的稀释比例。
WB | IHC/IC/ISH | ELISA | Southern/Northern | EMSA |
1:2000~5000 | 1:150~500 | 1:2000~5000 | 1:2000~5000 | 1:2000~5000 |
Streptavidin的分子量为66kD,可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数为Kd=10-15M。Streptavidin是一个4聚体蛋白,可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素,从Streptomyces adidinii中纯化获得,和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是,Streptavidin是一种非糖基化蛋白,并且基本不带电荷。Avidin的pI=~10.5,在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷,因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多,这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。
碱性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase,AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase)常被称作碱性磷酸酶(EC 3.1.3.1),是一类水解酶,通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,其去磷酸化作用的底物包括蛋白质、核苷酸和生物碱等,并在碱性条件下最为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase,CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测,例如在Western、ELISA、IHC、ICC、EMSA、Northern、Southern等时,催化BCIP/NBT等显色试剂显色或催化适当的化学发光试剂产生化学发光。本制品标记的就是小牛肠碱性磷酸酶。
组分 | 规格 |
碱性磷酸酶标记链霉亲和素 | 200μL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期1年。
本制品如果用于常规的Western检测,以每次检测需10mL 1:2000稀释的本制品计,可以检测40次。
Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等请参考相关实验步骤进行。起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
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