产品货号:
YT529
中文名称:
5×RNA寡核苷酸退火缓冲液
英文名称:
5×Annealing Buffer for RNA Oligos
产品规格:
1ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
RNA寡核苷酸退火缓冲液是一种经过我们多次实验证实、可以用于RNA oligo退火的缓冲液。用于siRNA而合成的互补的RNA oligo可以用该退火缓冲液进行退火,以形成双链RNA。使用5×RNA寡核苷酸退火缓冲液可以有效避免RNA oligo自身形成发夹结构,有利于退火的正确进行。
使用本制品操作非常简单,只需把待退火的RNA oligo和5×RNA寡核苷酸退火缓冲液按照一定比例混合后,置于PCR仪上,约60分钟即可完成。5×RNA寡核苷酸退火缓冲液经过特殊处理,不含RNase,可避免RNA的降解。
组分 | 规格 |
5×RNA寡核苷酸退火缓冲液 | 1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期1年。
如果一次退火反应体积为100μL,一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
- 本制品只适合于RNA oligo的退火,不适合用于DNA oligo的退火。
- 由于RNA非常容易被降解,一定要严格遵守RNA的操作规范,防止RNase污染。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 把待退火的RNA oligo用DEPC水配制成200μM。溶解Annealing Buffer for RNA Oligos(5X),混匀备用。
- 如下设置退火反应体系:
成分 用量 DEPC水 30μL 5×RNA寡核苷酸退火缓冲液 20μL RNA oligo A(200μM) 25μL RNA oligo B(200μM) 25μL 总体积 100μL
按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果用的PCR仪没有热盖,在反应体系上加入一滴矿物油以防止蒸发。 - 如下设置PCR仪进行退火反应:
步骤 温度 时间 说明 1 90℃ 1分钟 让oligo充分变性 2 每5秒下降0.1℃,降至25℃ 约60分钟 退火 3 4℃ 长时间保持 暂时存放 - 每5秒下降0.1℃,降至25℃的程序设置,以Bio-Rad的T100为例为:1.90℃,2:00;2.90℃,0.05,-0.1℃ per cycle;3.GOTO step 2,650X;4.4℃,∞。
- 如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每60秒下降1℃。程序设置以Bio-Rad的T100为例为:1.90℃,1:00;2.90℃,1:00,-1℃ per cycle;3.GOTO step 2,65X;4.4℃,∞。
- 如果条件有限,也可以将水浴锅加热至90℃,把PCR管放在水浴锅中,或者把煮沸的热水加入到保温杯或保温瓶中,待水温降到90℃时放入PCR管。所用水量控制在1~2小时内自然降温至25℃左右。此方法的退火效果可能会比使用PCR仪略差一些。
- 每5秒下降0.1℃,降至25℃的程序设置,以Bio-Rad的T100为例为:1.90℃,2:00;2.90℃,0.05,-0.1℃ per cycle;3.GOTO step 2,650X;4.4℃,∞。
- 退火结束后可以直接用于转染细胞,也可以-20℃冻存备用。
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