产品货号：
SV1495
中文名称：
PNGase F(无甘油，重组酶)
英文名称：
Recombinant PNGase F(Glycerol-free)
产品规格：
15kU|75kU
发货周期：
已停产
产品价格：
已停产
PNGase F是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：最内侧的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间。变性或非变性情况均可使用本产品。本产品不含甘油，便于HPLC和质谱分析。该酶的分子量为36000Da。
PNGase F几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-连接糖。
克隆自和平空间站伊丽莎菌并在E.coli中高度表达。
1单位指10μL的反应体系中，37℃条件下1小时从10μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。
保存：4℃
50mM NaCl，20mM Tris-HCl，5mM EDTA，pH7.5@25℃。
75℃加热10分钟。
无糖苷外切酶污染，无糖苷内切酶F1、F2和F3活性，无蛋白水解活性。
本方法中的反应体系可根据底物糖蛋白用量等比例放大，不同底物的最佳反应时间也不尽相同，需用户自行优化。
一、变性反应情况
二、非变性反应情况
相关搜索：PNGase F(无甘油，重组酶)，PNGase F，肽N-糖苷酶F，N-Glycosidase F，Recombinant PNGase F(Glycerol-free)
PNGase F几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-连接糖。
克隆自和平空间站伊丽莎菌并在E.coli中高度表达。
1单位指10μL的反应体系中，37℃条件下1小时从10μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。
| 组分 | 15KU | 75KU |
| Glycerol-free PNGase F(500U/μL) | 30μL | 150μL |
| 10×GlycoBuffer 2 | 1mL | 1mL |
| 10×糖蛋白变形缓冲液 | 1mL | 1mL |
| 10×NP-40 | 1mL | 1mL |
保存：4℃
50mM NaCl，20mM Tris-HCl，5mM EDTA，pH7.5@25℃。
- 1×GlycoBuffer 2：
50mM磷酸钠，pH7.5@25℃ - 1×糖蛋白变形缓冲液：
0.5% SDS，40mM DTT - 1×NP-40：
1% NP-40 in MilliQ-H2O
75℃加热10分钟。
无糖苷外切酶污染，无糖苷内切酶F1、F2和F3活性，无蛋白水解活性。
本方法中的反应体系可根据底物糖蛋白用量等比例放大，不同底物的最佳反应时间也不尽相同，需用户自行优化。
一、变性反应情况
- 按下表配制变性反应体系：
成分 用量 底物糖蛋白 1～20μg 10×糖蛋白变形缓冲液 1μL ddH2O 至10μL - 100℃加热10分钟使糖蛋白变性。
- 将变性的糖蛋白至于冰上冷却，并离心10秒钟。
- 按下表配制酶切反应体系：
成分 用量 变性的糖蛋白(上述步骤获得) 10μL 10×GlycoBuffer 2 2μL 10×NP-40 2μL ddH2O 至20μL
注：SDS抑制PNGase F活性，因此反应体系中必须加入一定量的NP40。 - 加入1μL PNGase F，轻轻混匀。
- 37℃反应1小时。
二、非变性反应情况
- 按下表配制变性反应体系：
成分 用量 底物糖蛋白 1～20μg 10×GlycoBuffer 2 2μL ddH2O 至20μL - 加入2～5μL PNGase F，轻轻混匀。
- 37℃反应4～24小时。
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