产品货号：
SV1346
中文名称：
T7 ARCA mRNA加帽加尾试剂盒
英文名称：
T7 ARCA mRNA Kit(with tailing)
产品规格：
20T
发货周期：
已停产
产品价格：
已停产
本试剂盒用于以DNA为模板，快速的体外合成带帽带尾的mRNA。本试剂盒使用T7 RNA聚合酶通过共转录，将抗-反向帽类似物（ARCA，货号：SV2000）加到mRNA上。利用ARCA/NTP混合液、T7 RNA聚合酶混合液和适当的DNA模板，很容易建立转录反应。试剂盒也可以用于将5mCTP、Pseudo-UTP和其它修饰的核苷酸引入mRNA。试剂盒合成的mRNA可以用于转染、体外翻译和RNA疫苗。试剂盒包含DNA模板去除和mRNA快速纯化的DNase I和LiCl。
大多数真核mRNA的高效翻译需要在5′末端有一个7-甲基鸟苷帽结构，3′末端有一个Poly（A）尾。
保存：-20℃
本试剂盒中含有足够的试剂，可进行20次20μL反应。每个标准反应从1μg模板中产出高达20μg的带帽mRNA。经Poly（A）加尾和氯化锂沉淀纯化后，可获得高达25μg的带帽带尾mRNA。
配制RNA转录反应时请佩戴手套。确保使用nuclease-free的耗材和试剂，避免RNase污染。转录反应体系通常为20μL，但可根据需要等比例放大。
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大多数真核mRNA的高效翻译需要在5′末端有一个7-甲基鸟苷帽结构，3′末端有一个Poly（A）尾。
| 组分 | 规格 |
| 10×Poly(A) Reaction Buffer | 1.5mL |
| T7 RNA Polymerase Mix | 40μL |
| 2×ARCA/NTP Mix | 200μL |
| RNase-free DNase I (2U/μL) | 40μL |
| CLuc Control Template(0.25mg/mL) | 20μL |
| 氯化锂溶液 | 1.4mL |
| E.coli Poly(A) Polymerase | 100μL |
保存：-20℃
本试剂盒中含有足够的试剂，可进行20次20μL反应。每个标准反应从1μg模板中产出高达20μg的带帽mRNA。经Poly（A）加尾和氯化锂沉淀纯化后，可获得高达25μg的带帽带尾mRNA。
配制RNA转录反应时请佩戴手套。确保使用nuclease-free的耗材和试剂，避免RNase污染。转录反应体系通常为20μL，但可根据需要等比例放大。
- 温室下按下表加入各成分配制20μL反应体系。
成分 用量 2×ARCA/NTP Mix 10μL 模板DNA 1μg T7 RNA Polymerase Mix 2μL Nuclease-free water 至20μL - 混匀，37℃反应30分钟。
注：
① 反应时间取决于模板数量、质量和RNA转录物长度。对于转录物长度超过0.5kb的反应，反应30分钟即可获得最大产出。对于RNA转录物较短（＜0.5kb）的反应，反应时间可以大于1小时，也可以过夜孵育。
② 如果反应时间≤1小时，可使用水浴或加热块；如果反应时间超过1小时，请使用干燥空气培养箱或PCR机。 - 加入2μL DNase I，混匀，37℃孵育15分钟，以去除模板DNA。
如果模板DNA对下游实验无影响，也可跳过此步骤。 - 如有需要可保存1μL用于凝胶分析。不要加热反应或纯化RNA，直接继续进行加尾反应。
- 按下表加入各成分，配制Poly(A)加尾反应。
成分 50μL体系 100μL体系 Nuclease-free water 20μL 65μL 体外转录反应产物 20μL 20μL 10×Poly(A) Reaction Buffer 5μL 10μL Poly(A) Polymerase 5μL 5μL 总体积 50μL 100μL
注：上述体外反应体系中有足够的ATP，所有无需额外加入ATP。 - 37℃反应30分钟，如有需要可保存1μL用于凝胶分析。
- 纯化出已加帽加尾的mRNA用于下游反应。
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