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产品货号：
SV1333
中文名称：
牛痘病毒加帽系统
英文名称：
Vaccinia Capping System
产品规格：
400U
发货周期：
已停产
产品价格：
已停产
本系统基于牛痘病毒加帽酶（Vaccinia virus Capping Enzyme,VCE)，将7-甲基鸟苷帽结构（Cap 0）加到RNA的5'末端。该帽结构对mRNA的稳定、转运与翻译密切相关。
牛痘加帽酶有D1和D12两个亚基构成，其中D1亚基含有RNA三磷酸酶、鸟苷酰转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶三种酶催化活性，所有这些活性都是添加一个完整的Cap 0结构，即m7Gppp (5′) N所必需的。加帽反应不仅高效而且方向正确，不像共转录会添加上一些帽类似物。
携带牛痘病毒加帽酶基因的E.coli菌株。
1单位指37℃条件下，1小时内将10pmol (α32P) GTP掺入到一条80个核苷酸的转录产物上所需要的酶量。
保存：-20℃
20mM Tris-HCl，100mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol，0.1% (w/v) Triton X-100，pH8@25℃
1×Capping Buffer，0.5mM GTP，0.1mM SAM，37℃。
1×Capping Buffer：
50mM Tris-HCl，5mM KCl，1mM MgCl2，1mM DTT，pH8@25℃
无单链或双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶和RNase污染。
以20μL反应体系为例，对10μg RNA(≥100nt)进行加帽反应，反应体系可根据实验需要等比例放大。
相关搜索：牛痘病毒加帽系统，牛痘病毒加帽酶，牛痘加帽酶，VCE，Vaccinia Capping Enzyme，Cap0加帽系统，Vaccinia Capping System
牛痘加帽酶有D1和D12两个亚基构成，其中D1亚基含有RNA三磷酸酶、鸟苷酰转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶三种酶催化活性，所有这些活性都是添加一个完整的Cap 0结构，即m7Gppp (5′) N所必需的。加帽反应不仅高效而且方向正确，不像共转录会添加上一些帽类似物。
携带牛痘病毒加帽酶基因的E.coli菌株。
1单位指37℃条件下，1小时内将10pmol (α32P) GTP掺入到一条80个核苷酸的转录产物上所需要的酶量。
| 组分 | 规格 |
| 牛痘病毒加帽酶(10U/μL) | 40μL |
| 10×Capping Buffer | 100μL |
| 32mM SAM | 100μL |
| 10mM GTP | 50μL |
保存：-20℃
20mM Tris-HCl，100mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol，0.1% (w/v) Triton X-100，pH8@25℃
1×Capping Buffer，0.5mM GTP，0.1mM SAM，37℃。
1×Capping Buffer：
50mM Tris-HCl，5mM KCl，1mM MgCl2，1mM DTT，pH8@25℃
无单链或双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶和RNase污染。
- 用于加帽反应的RNA应先纯化，并在无核酸酶水中重悬，RNA溶液不能含有EDTA和盐。
- 如果想添加RNase Inhibitor，可在反应的第一步中加入0.5μL。
- 加帽反应前，RNA溶液需加热5分钟，以去除转录物5'末端的二级结构，5'末端结构复杂的，可延长加热时间至10分钟。
- SAM在pH7～8，37℃条件下不稳定，因此需要现配现用。建议根据反应用量将SAM溶液分装成2mM浓度工作储备液，将2mM SAM工作储备液始终置于冰上。
- 对于已知5'末端结构化的转录物，可以延长反应时间至60分钟，以提高加帽效率。
以20μL反应体系为例，对10μg RNA(≥100nt)进行加帽反应，反应体系可根据实验需要等比例放大。
- 在1.5mL离心管中加入10μg RNA，加无核酸酶水至15μL。
- 65℃加热5分钟。
- 置于冰上5分钟。
- 配置反应体系
成分 用量 变性RNA(上述步骤获得) 15μL 10×Capping Buffer 2μL 10mM GTP 1μL 2mM SAM 1μL 牛痘病毒加帽酶(10U/μL) 1μL 总体积 20μL - 37℃反应30分钟。
- 所得加帽RNA可以直接用于下游实验，一些实验可能需要纯化后使用。
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