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M13KO7是gII基因具有Met40IIe突变的M13噬菌体。M13KO7具有P15A的复制起点和Tn903卡那霉素抗性基因，这两个片段插入M13的复制起点。M13KO7在没有噬菌粒DNA的条件下也能复制。当存在一个携带有野生型的M13或f1复制起点的噬菌粒时，单链噬菌粒可以完整包装，并分泌到培养基中。该特性可用于生产用作突变和测序的单链噬菌粒DNA。

M13KO7噬菌体上清按照标准程序分离自受侵染的E.coli ER2738。

组分	规格
M13KO7辅助噬菌体(1011pfu/mL)	2×0.9mL
说明书	1份

保存：-20℃


绝对滴度：感染对数生长中期的E.coli ER2690，获得的产量是1.0×10¹¹pfu/mL。
活细胞滴度：在LB琼脂糖培养基培养噬菌体悬浮液，获得的产量＜10²/mL。


用3×10⁸pfu/mL的M13K07重叠感染对数旱期的E.coli ER2738/pLlTMUS 38，在含有70μg/mL卡那霉素的条件下孵育18小时，产生的上清液经过噬菌体和噬菌粒相对滴度检测如下：将上清在65℃加热杀死所有活细胞，稀释的上清液与对数生长中期的E.Coli ER2690短暂孵育，然后分别接种于空平板(为了测定M13K07滴度)和氨苄平板(为了测定包装的pLITMUS 38滴度)。氨苄抗性的菌落和噬菌斑的比率为10:1，琼脂糖凝胶电泳证实噬菌粒的包装量超过辅助噬菌体的10倍。


不推荐将M13KO7作为一个克隆载体使用。构建噬菌体展示文库，推荐使用Ph.D.肽库展示克隆系统。


单链噬菌粒DNA的分离程序：

• 将噬菌粒载体转化到适当的F’菌株(CJ236用作Kunkel突变)中。
  
• 将新鲜的菌落接种到50mL LB(不含抗生素)中，置于37℃通风环境培养，直到稍微浑浊(＜10 Klett,A600＜0.05)。加入尿嘧啶核苷酸至0.25μg/mL用于Kunkel突变。
  
• 加入50μL的M13K07辅助噬菌体(终浓度1×10⁸pfu/mL)，继续在良好通风环境培养60～90分钟。
  
• 加入卡那霉素至终浓度70μg/mL，在通风环境过夜(14～18小时)培养。
  
• 8000rpm离心10分钟，收集上清到一个新的离心管后再次离心。
  
• 吸取90%上清到新离心管中，加入0.2倍体积的2.5M NaCl/20% PEG,4℃温育60分钟。
  
• 8000rpm离心10分钟获得噬菌体，弃上清，再次短暂离心。
  
• 加入1.6mL TE重悬沉淀，转移到2个离心管中。
  
• 离心1分钟，分别将上清转移到新离心管中。
  
• 每管加入200μL 2.5M NaCl/20% PEG溶液置于室温5分钟后离心10分钟。
  
• 弃上清，再次短暂离心，吸去残留上清。
  
• 分别用300μL TE重悬沉淀，用苯酚粗提(离心前放置15分钟)，然后用苯酚/氯仿(50/50:v/v，两次)抽提，最后氯仿抽提。加入30μL 2.5M NaOAc(pH4.8)和乙醇沉淀。
  
• 用25～50μL TE溶解干燥后的沉淀，用于pUC原始载体的单链噬菌粒产量应该＞50μg。

相关搜索：M13KO7辅助噬菌体，M13KO7 Helper Phage