产品货号：
KL2506077
中文名称：
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
英文名称：
Cell TUNEL Kit
产品规格：
20T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品为基于TdT生物素标记和HRP-DAB检测的TUNEL细胞凋亡检测试剂盒。TUNEL即TdT dUTP Nick-End Labeling，其原理是基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）的催化下加上生物素标记的dUTP，经过SA-HRP信号放大和显色后，可以通过显微镜观察调亡细胞。
- 即开即用，用户不需要单独优化实验条件。
- 高灵敏度，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡。
- 由于细胞一旦凋亡就有DNA断裂，故可以检测到早期的细胞凋亡。
- 基于TdT加尾法，更容易标记凋亡细胞而非坏死细胞。
- 起始材料是培养细胞。如果样本是组织切片则需选用另一款产品（250607-2）。
- 本制品足够20个细胞样本的TUNEL实验。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 5×TdT反应液 | 500μL |
| TdT酶 | 25μL |
| TUNEL底物液 | 25μL |
| 双氧水 | 300μL |
| 100×SA-HRP浓缩液 | 10μL |
| 1×DAB溶解液 | 1mL |
| DAB干粉 | 1mg |
| DAB增强剂 | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
多聚赖氨酸、PBS、TX-PBS（含0.2% Triton X-100的PBS）、2×SSC。
一、玻璃载片的预处理
- 如果一次实验要测试N个样本，则需要准备N+2样本，多出的一个是凋亡阴性对照（NC，无任何药物诱导细胞凋亡），另一个是凋亡阳性对照（PC，用相关药物诱导细胞凋亡）。
- 用自选常规方法对N+2张干净的玻璃载片进行多聚赖氨酸包被。然后将PBS洗涤后的细胞悬液铺在载片上，在培养箱里放置15分钟，然后进行固定。也可以直接在多聚赖氨酸（不含保存剂）包被的载片上进行细胞培养，用PBS洗涤两次后进行固定。
- 固定：在Coplin盒中用4%多聚甲醛或10%中性福尔马林室温固定25分钟。
- 浸入PBS中，室温放置5分钟。重复此操作1次。
- 浸入TX-PBS中，室温放置5分钟。
- 浸入PBS中，室温放置5分钟。
- 重复上步操作1次，然后进入第10步。
二、载片的TdT标记
- 在每张载片上滴加40μL PBS和10μL 5×TdT反应液，室温孵育15分钟（等待期间可以进行下步的操作）。孵育结束后覆盖液体的处理按第10步进行。
- 在微量离心管中按下表新鲜配制TUNEL标记液。该溶液必须现配现用，没用完的不必保留。N+2块载片所需量按N+3配制：
成分 标记液 自备超纯水 38μL×(N+3) TUNEL底物液 1μL×(N+3) 5×TdT反应液 10μL×(N+3) TdT酶 1μL×(N+3) - 用滤纸放在载片边缘（不要碰触载片）小心吸走第8步加入到载片上的液体，吸走后马上加入标记液，盖上塑料盖片使液体均匀分布（不能使用玻璃盖片），然后再如法处理下一张载片。
- 将所有放湿盒中37℃孵育60分钟。
- 移除盖片，将载片放入自备2×SSC中浸泡10分钟。
- 用PBS洗涤载片3次，每次5分钟。此步可充分去除未标记底物，避免其对后续反应的干扰。此时间不能缩短。
三、载片的显色
- 将载片浸入到新鲜配制的双氧水工作液中，室温孵育5分钟。双氧水工作液配制方法是将双氧水按1:100的体积比加入到PBS中混匀即可。
- 用PBS洗涤三次，每次5分钟。
- 在载片上滴加50μL新鲜配制的SA-HRP工作液，室温孵育20分钟。SA-HRP工作液配制方法是将试剂盒提供的100×SA-HRP浓缩液按1:100的体积比跟PBS混合，轻柔混匀即可。本试剂盒提供的100×SA-HRP浓缩液足够配制1mL SA-HRP工作液，足够20张载片使用。
- 用PBS洗涤3次，每次5分钟。
- 新鲜配制DAB溶液。在装有DAB干粉的棕色管中，加入1mL DAB溶解液，盖上盖子后颠倒20次溶解。再按每张载片需要50μL DAB显色液的比例计算所需DAB显色液体积，并按下表配制（下表以配制1mL为例，用户如需要配制其他体积，可按比例增减各成分用量）：
成分 用量 DAB溶液 990μL DAB增强剂 10μL 双氧水 1μL - 将50μL上步配制的DAB显色液滴加在每张载片上，室温避光放置10分钟。
- 浸在超纯水中数次，空气中干燥后按常规操作封片并在显微镜下检测或照相。
相关搜索：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒，Cell TUNEL Kit