产品货号：
KL2306502
中文名称：
RNA-LNP包封率检测试剂盒
英文名称：
RNA-LNP Encapsulation Efficiency Assay Kit
产品规格：
500T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是基于RiboGreen染料法对RNA-LNP包封率进行测定的试剂盒。
RiboGreen与RNA结合后会在Ex 480nm/Em 520nm下产生荧光，并且荧光强度跟RNA浓度成线性关系。
- 即开即用，用户不需要优化条件。
- 高RiboGreen浓度测定的线性范围在25ng/mL-500ng/mL，低RiboGreen浓度测定范围在1ng/mL-50ng/mL。
- 提供RNA标准品，用于制作标准曲线。
- 抗核苷酸、盐类、尿素、乙醇、氯仿、表面活性剂、蛋白和琼脂糖干扰。但不能抗DNA干扰，故用户需先除去样本中的DNA。
- 跟微型荧光仪、荧光酶标仪、标准的荧光光度计或滤光荧光计兼容。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| RiboGreen染料 | 100μL |
| 20×TE浓缩液（RNA级） | 25mL |
| RNA-LNP包封率测定用标准品 | 10μL |
| 10×LNP溶解液 | 25mL |
保存：-20℃，避光，有效期6个月。
本试剂盒足够200次0.2mL体积的高RiboGreen浓度检测，足够2000次0.2mL体积的低RiboGreen浓度检测。
RNA-LNP样品，1×PBS，荧光光度计/荧光酶标仪
- 核酸可以跟玻璃结合，故避免使用任何玻璃器皿，包括石英比色皿。
一、样本透析预处理（本试剂盒不含相关试剂）
- 将收集到的RNA-LNP加载到预先水化的透析卡盒中。
- 切勿刺破或损坏透析卡盒的膜，膜损坏将导致RNA-LNP丢失。
- 将透析袋放入1×PBS中透析至少2小时。
- 透析后，将装有mRNA-LNP的透析卡盒转移到无菌生物安全柜中，使用带针头的注射器取出mRNA-LNP。用0.22μm针头过滤器对RNA-LNP进行无菌过滤，并收集到无菌锥形管中。
二、溶液配制
- 配制50mL TE缓冲液：在一干净的RNase-free离心管中，加入47.5mL自备DEPC水，再加入2.5mL 20×TE浓缩液（RNA级），颠倒20次摇晃混匀得TE缓冲液。没用完的本溶液需要-20℃保存。用户可以选择配制其他体积，只是各成分加入量需要相应调整。
- 新鲜20mL LNP溶解液的配制：一干净的RNase-free离心管中，加入18mL TE缓冲液，再加入2mL 10×LNP溶解溶液，颠倒20次摇晃混匀得LNP溶解液待用。
- 新鲜2×RiboGreen染液的配制：每个测试需要本溶液100μL，根据测试反应数计算所需本染液的体积。如果是高浓度检测，需要稀释200倍；如果是低浓度检测，需要稀释2000倍。下面以配制1mL高浓度检测2×RiboGreen染液为例：在1.5mL离心管中加入5μL RiboGreen染料，再加入995μL TE缓冲液，颠倒20次混匀后待用，此溶液需即配即用。
- 高浓度的RNA标准液的配制：在一干净的EP管中取1μL RNA-LNP包封率测定用标准品，加入2499μL上步制备的TE缓冲液，涡旋振荡1分钟得浓度为2μg/mL的RNA标准液H。没有用完的本标准液需要放-80℃保存。
- 低浓度的RNA标准液的配制：在另一新离心管中，加入950μL TE缓冲液和50μL RNA标准液H，涡旋振荡1分钟得浓度为100ng/mL的RNA标准液L。没有用完的本标准液需要放-80℃保存。
三、样本检测
- 通过稀释2μg/mL的RNA标准液H配制一系列的2×高浓度检测RNA标准溶液；通过稀释100ng/mL的RNA标准液H配制一系列的2×低浓度检测RNA标准溶液。
- 将mRNA-LNP用TE缓冲液和LNP溶解液分别进行1:100稀释，制成样品RE和样品RX。
- 设置反应：在96孔板的微孔中，按下表加入各成分（下面以低浓度的RNA标准液为例）。
孔号 RNA样本/100μL 低浓度检测2×RiboGreen染液 RNA终浓度 1 0ng/mL RNA标准液L 100μL 0ng/mL 2 2ng/mL RNA标准液L 100μL 1ng/mL 3 10ng/mL RNA标准液L 100μL 5ng/mL 4 20ng/mL RNA标准液L 100μL 10ng/mL 5 50ng/mL RNA标准液L 100μL 25ng/mL 6 100ng/mL RNA标准液L 100μL 50ng/mL 7 样品RE1 100μL 待测 8 样品RX1 100μL 待测 9 样品RE2 100μL 待测 10 样品RX2 100μL 待测
四、荧光分析
- 将孔板放入酶标仪中，涡旋混合1分钟，然后静置4分钟。
- 在激发/发射波长=480nm/520nm下测量荧光强度。
- 以RNA浓度为横轴，以荧光读数为纵轴，绘制标准曲线。
- 根据标准曲线计算每个出待测样品RE浓度和待测样品RX浓度。
- 根据公式包封效率% =(样品RX浓度-样品RE浓度)/(样品RX浓度) * 100%。
- 如果待测样本的浓度在标曲外，标曲的浓度需要适当调整，使样本的读数在线性范围内。
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