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本制品是专门用于脂多糖（LPS）非变性PAGE电泳的试剂盒，PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

• 一站式，用户只需要准备去离子水和样品，不需要单独优化各种条件，十分方便。
  
• 安全，免去了实验人员接触粉末状的有毒物品丙烯酰胺。
  
• 本制品足够30次mini PAGE凝胶电泳。

• PAGE浓度的选择：根据脂多糖大小选择PAGE凝胶的浓度。5%的PAGE的有效分辨范围为52～325kDa、8%的PAGE的有效分辨范围为39～260kDa、12%的PAGE的有效分辨范围为26～130kDa。
  
• 体积的选择：根据制胶板体积，结合梳子的厚度，计算所需PAGE胶的体积。
  
• 配制PAGE胶（下面以配制100mL PAGE胶为例计算用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加）：
  
  • 新鲜配制10%的APS（过硫酸铵）：称量约0.1g硫酸铵干粉到一个1.5mL EP管中，按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL自备去离子水的比例将水加到管中，摇晃到硫酸铵粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周，超过一周不能再用。
    
  • 新鲜配制30%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（29:1）：将2g甲叉双丙烯酰胺倒入到装有60g丙烯酰胺的250mL棕色塑料瓶中，天平上去皮，加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解（约需10～20分钟）。此溶液简称为30% AB溶液，最好在一个月内用完，4℃保存。
    
  • 配PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，以12%的PAGE胶为例，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液和10×TBE电泳液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
    

    胶浓度	各成分用量（mL）			总体积（mL）
    	去离子水	30% AB溶液	10×TBE电泳液
    5%	73.4	16.6	10.0	100
    6%	70.0	20.0	10.0	100
    7%	66.7	23.3	10.0	100
    8%	63.3	26.7	10.0	100
    9%	60.0	30.0	10.0	100
    10%	56.7	33.3	10.0	100
    11%	53.3	36.7	10.0	100
    12%	50.0	40.0	10.0	100

  • 摇晃混匀。最好能抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应），无条件也可以不脱氧。
    
  • 加入500μL 10% APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
    
  • 在PAGE胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
    
  • 室温聚合30～60分钟（低温抑制聚合反应，故最好室温）。
    
  • 待PAGE胶凝固后拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
    
  • 放4℃冰箱预冷30分钟～12小时。为了防止PAGE胶收缩，最好在其顶部加少量1×TBE缓冲液。使用预冷的PAGE胶有利于脂多糖在电泳时保持其构型。
• 将预冷后的PAGE凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
  
• 取3～5μL脂多糖样品，加入等体积2×脂多糖非变性PAGE上样液，85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μL上样。上样量跟检测方法的灵敏度相关，可根据预实验结果和脂多糖样品的具体浓度调整上样量。
  
• 连接电源线，打开电源开关。使用25 W的功率，电泳5～7小时（对3～40cm长的PAGE胶而言）。电泳时最好能保持恒温在4℃。
  
• 终止电泳，取出凝胶进行后续的银染处理。不建议使用灵敏度低于银染的方法，一般方法没法检测到。