产品货号：
KD2086
中文名称：
毕赤酵母感受态制备与转化试剂盒
英文名称：
Pichia pastoris receptive Preparation and Conversion Kit
产品规格：
20T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品用于毕赤酵母化学感受态的制备，与酿酒酵母感受态的制备不同。
保存：-20℃，有效期1年。
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| 组分 | 20T | 100T |
| B1溶液(制备液) | 105mL | 105mL×5 |
| B2溶液(转化液) | 28mL | 50mL×3 |
| B3溶液(悬浮液) | 20mL | 50mL×2 |
| Carrier DNA | 200μL | 1mL×2 |
保存：-20℃，有效期1年。
- 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量，质粒总体积不超过感受态体积的1/10。
- 毕赤酵母适宜的生长温度是28～30℃，温度超过32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。
- 酵母感受态细胞的制备
- 活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPD培养基上划线，在30℃培养2～4天。
- 把酵母细胞接种到10mL液体YPD培养基中，30℃摇床过夜培养后将培养物按1%的接种量接种到100mL的YPD培养基中培养，直至其OD值为0.6～1.0。
- 每10mL菌液可用于一次转化。以下操作步骤用于10mL的菌液。
- 3000rpm离心3min收集菌体沉淀。
- 加入5mL的B1溶液重悬菌体，3000rpm离心3min收集菌体沉淀。
- 再加入200μL B1溶液重悬菌体，转移到无菌的1.5mL离心管，可直接用于转化反应或冻存备用。
- 将感受态缓慢冷冻后置于-80℃冰箱保存。建议将感受态细胞放入程序降温盒，或者几层纸包好放入泡沫盒中，再放于-80℃冰箱过夜，后将感受态取出置于-80℃保存。保存半年基本不影响其转化效率。使用时，-80℃冰箱取出，可直接用于转化。
- 缓慢冷冻会保证良好的转化效率。
- 扩大酵母菌培养体积，相应增加冻存液的使用量，可以一次性制备多只酵母感受态细胞。
- 缓慢冷冻会保证良好的转化效率。
- 活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPD培养基上划线，在30℃培养2～4天。
- 酵母转化
- 取0.1～5μg的质粒DNA(线性化质粒5～50μg)和10μL Carrier DNA(95～100℃，5min，快速冰浴，重复一次)，加入到未融化的感受态细胞上，置于30℃水浴，每隔15s颠倒混匀，至感受态完全融化。
- 加入1.4mL B2溶液颠倒混匀，30℃水浴60min。
- 3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀，加入1mL B3溶液重悬菌体。
- 3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀，加入100μL B3溶液重悬菌体，将100μL菌体全部涂布到相应的平板培养基，30℃恒温培养3～5天直至平板出现酵母克隆。
- 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻Carrier DNA，反复冻融3～5次后需重新变性Carrier DNA。
- 取0.1～5μg的质粒DNA(线性化质粒5～50μg)和10μL Carrier DNA(95～100℃，5min，快速冰浴，重复一次)，加入到未融化的感受态细胞上，置于30℃水浴，每隔15s颠倒混匀，至感受态完全融化。
相关搜索：毕赤酵母感受态制备与转化试剂盒，毕赤酵母感受态细胞制备