产品货号:
KD1704
中文名称:
DNA样品保存液
英文名称:
DNA preservation solution
产品规格:
100mL|500mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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产品简介:
DNA样品保存液(土壤)是一种无毒的可直接使用的样品保存液,可以在常温下采集、保存土壤样品,有效防止样本中微生物发生改变,保护样本中微生物DNA不被降解。
从保存液中提取的微生物DNA后续可用于酶切和PCR等多种分子生物学实验。
在保存液中的样品在常温下可保存两周以上(室温高至少可以保存10天),4℃保存3个月以上,在-20℃和-80℃下可长期保存。保存和运输过程中应避免样品反复冻融。
操作说明:
1.根据土壤体积分装DNA样品保存液到保存管中,保存液体积约为土壤体积的2~3倍。
注意:保存液加入后土壤样品至少依旧具有流动性。如样品较干燥,适当增加保存液体积。
2.取土壤样品加入到保存液中,震荡混匀(可以加入几颗玻璃珠),贴好样品标签。
3.2周内(室温保存)进行DNA提取步骤。如时间过长,可以低温保存。
注意:置于-20℃或者-80℃之前,至少需要常温或者4℃放置24小时之后,以便于保存液的渗透。
4.DNA提取步骤。
DNA提取方法(自备试剂)或用其他提取方法提取:
1.样品匀浆制备:将样品管用漩涡震荡器震荡,混匀至无块状;将枪头(1mL)减去1cm左右,吸之前摇匀,尽量吸取内容物,否则提取的DNA量过少。
2.取200μL样品匀浆至2mL离心管。加入1mL PBS,用旋涡振荡器混合均匀,离心(15000rpm,5min,4℃)。
3.弃1mL上清,重复2一次。
4.弃上清后,加入300μL Tris-SDS裂解液(或其他裂解液),500μL Tris-饱和酚,移入已加入0.33~0.35g玻璃珠(φ0.1mm)的2mL圆底离心管中。
5.震荡呈乳白色,离心(15000rpm,5min,4℃)。
6.将上层液400μL转移到一个新的离心管中(圆头),加入200μL Tris-酚,200μL氯仿/异戊醇(24:1)。注:中间白色为变性蛋白相不能碰。
7.手摇(10~20次)(上下颠倒即可,轻柔),混匀呈白色,离心(15000rpm,5min,4℃)。
8.将250μL上层液转移到新的1.5mL离心管中,加入25μL 3M的乙酸钠(pH=5.2),加入300μL异丙醇,手摇混匀后离心(15000rpm,5min,4℃)。-20℃静置20min.
9.弃上清(直接倒掉即可),加入500μL 70%乙醇,手摇混匀,离心(15000rpm,5min,4℃)。
10.弃上清(直接倒掉即可),离心(12000rpm,1min,常温),用枪头(斜)吸去多余液体,开盖,室温干燥15min。
11.加入100μL TE,5μL RNA酶,轻弹混匀,小离心机轻微离心(到6000rpm立即停止),37℃恒温箱静置10min.
12.测定浓度及电泳。
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