产品目录

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。本制品含少量DTT，但不含有毒物质β-巯基乙醇，使蛋白上样操作相对安全健康。

• 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液中含少量DTT，有轻微刺激性气味。
  
• 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液必须完全溶解后再使用。建议根据使用量和频率分装冻存，应避免反复冻融。
  
• 本制品用于蛋白变性时，建议95℃水浴或PCR仪加热5分钟，温度过高(如100℃)或时间过长(如超过15分钟)，有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
  
• 本制品含有溴酚蓝指示剂，pH受温度影响，颜色可能有所不同；低温冻存条件下，呈深棕色~深蓝色凝固状态，不影响正常使用。
  
• 本制品稀释至1×后可以直接用于细胞或组织样品的裂解。
  
• 加热前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体，通常在本上样缓冲液内95℃水浴加热8～10分钟后可使该粘稠的半透明状物体消失，便于后续的上样操作。如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组DNA含量较高，加热5～10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体，此时需要再加热5～10分钟或者加入适量1×的蛋白上样缓冲液后再加热3～5分钟。充分加热后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放，同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失，这样就不会影响后续的上样操作了。适当超声或使用1mL注射器反复抽吸也可以打断基因组DNA从而使粘稠感消失。

• 在室温或不超过37℃的水浴中溶解5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。使用完毕后应置于-20℃保存。
  
• 取适量的蛋白样品和5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液按4∶1的比例混合，充分混匀。如40μL蛋白样品加入10μL上样缓冲液(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
  
• 95℃水浴加热5～10min，以充分变性蛋白。
  
• 冷却到室温后，经10000～14000rpm离心2～5min，取上清直接上样电泳。
  
• 通常电泳至蓝色染料到达PAGE胶的底部附近即可停止。