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本试剂盒用于SDS聚丙烯酰胺凝胶，把所需的缓冲液、SDS等预混于4×下层胶缓冲液和4×上层胶缓冲液，分别含有Tris-HCl(pH8.8)、SDS和Tris-HCl(pH6.8)、SDS。

• 过硫酸铵配制成10%溶液分装后，置于-20℃保存，应尽量减少室温存放时间以防失效；取出的APS溶液可短期4℃保存。
  
• TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖，凝胶过程中起到促凝剂的作用。
  
• 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果冬天室温较低情况下上下层胶出现白色沉淀是正常现象可以置于37℃水浴锅溶解后使用；冬天气温较低，分离胶凝固较慢，可将胶板置于空调下加速凝固。
  
• 30% Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性，请小心操作，长期使用置于4℃有助于其性能的稳定。
  
• 在配胶过程中所使用的长短玻璃板一定要清晰干净，如有胶体附着可能会导致电泳过程中漏样的发生。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 配制10%过硫酸铵：直接在0.5g APS中加入5mL蒸馏水(1g每瓶加入10mL蒸馏水)，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或4℃。
  
  • 一般用1.5mL EP管分装成0.5～1mL每支，-20℃保存，每支使用2～3次即弃用；短期使用时可保存于4℃，1周有效。
• 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照下表配制分离胶(下层胶)：
  

  胶浓度	成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL)
  		5	10	15	20	25	30	40	50
  6%	蒸馏水	2.6	5.3	7.9	10.6	13.2	15.9	21.2	26.5
  	30% Acr-Bis(29:1)	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0	6.0	8	10.0
  	4×下层胶缓冲液	1.3	2.5	3.8	5.0	6.3	7.5	10	12.5
  	10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.25	0.3	0.4	0.5
  	TEMED	0.004	0.008	0.012	0.016	0.02	0.024	0.032	0.04
  8%	蒸馏水	2.3	4.6	6.9	9.3	11.5	13.9	18.5	23.2
  	30% Acr-Bis(29:1)	1.3	2.7	4.0	5.3	6.7	8.0	10.7	13.3
  	4×下层胶缓冲液	1.3	2.5	3.8	5.0	6.3	7.5	10	12.5
  	10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.25	0.3	0.4	0.5
  	TEMED	0.003	0.006	0.009	0.012	0.015	0.018	0.024	0.03
  10%	蒸馏水	1.9	4.0	5.9	7.9	9.9	11.9	15.9	19.8
  	30% Acr-Bis(29:1)	1.7	3.3	5.0	6.7	8.3	10	13.3	16.7
  	4×下层胶缓冲液	1.3	2.5	3.8	5.0	6.3	7.5	10	12.5
  	10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.25	0.3	0.4	0.5
  	TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008	0.01	0.012	0.016	0.02
  12%	蒸馏水	1.6	3.3	4.9	6.6	8.2	9.9	13.2	16.5
  	30% Acr-Bis(29:1)	2.0	4.0	6.0	8.0	10.0	12.0	16.0	20.0
  	4×下层胶缓冲液	1.3	2.5	3.8	5.0	6.3	7.5	10	12.5
  	10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.25	0.3	0.4	0.5
  	TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008	0.01	0.012	0.016	0.02
  15%	蒸馏水	1.1	2.3	3.4	4.6	5.7	6.9	9.2	11.5
  	30% Acr-Bis(29:1)	2.5	5	7.5	10	12.5	15.0	20.0	25.0
  	4×下层胶缓冲液	1.3	2.5	3.8	5.0	6.3	7.5	10	12.5
  	10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.25	0.3	0.4	0.5
  	TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008	0.01	0.012	0.016	0.02

• 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)
  

  成分	配制不同体积5% SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(mL)
  	2	3	4	6	8	10
  蒸馏水	1.17	1.75	2.33	3.5	4.7	5.8
  30% Acr-Bis(29:1)	0.33	0.5	0.67	1.0	1.3	1.7
  4×上层胶缓冲液	0.5	0.75	1.0	1.5	2.0	2.5
  10%过硫酸铵	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
  TEMED	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01

• 电泳：静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔；加入Tris-甘氨酸电泳缓冲液；将待测蛋白与蛋白上样缓冲液混合，煮沸5～10min后加入样品孔进行电泳，其中Tris-甘氨酸电泳缓冲液可自行配制或采购5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液；蛋白上样缓可自行配制或采购5×SDS-PAGE蛋白加样缓冲液；同时也可以使用考马斯亮蓝染色液以及丽春红S染色液验证蛋白转膜是否成功；Western后续封闭、一抗二抗孵育、曝光均有对应产品。