产品货号:
BTN11-230373
中文名称:
超敏dsDNA定量试剂盒
英文名称:
PicoGreen Ultra Sensitive dsDNA Assay Kit
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
对dsDNA进行准确定量是很多重要的分子生物学实验的前提。由于不同的方法有不同的线性范围和检测灵敏度,因此不同方法的适用样本也不同。其中,PicoGreen和SYBR Green I染料法适用于浓度在25pg/mL以上的DNA样品,灵敏度最高。本制品根据PicoGreen定量原理开发。
反应示意图如下(图中PG表示PicoGreen,SG表示SYBR Green I):
- 即开即用,用户不需要单独摸索最佳条件。
- 操作简单,只需要将PG工作液与待测dsDNA样品混合即可。
- 所用PG染料对dsDNA具有高度选择性,对单链DNA和RNA几乎无反应。
- 线性范围在10ng/mL-10μg/mL(相当于10pg/uL-10ng/uL)。
- 本试剂需要使用Qubit荧光仪或类似荧光仪,也可以用荧光酶标仪替代。
- 能抗一定浓度的残留蛋白质、去污剂和盐类等干扰,详见附表。
- 本制品足够100次100μL体系的测定,每次用10μL样品。
- 本制品只能用于科研。
组分 | 规格 |
dsDNA定量阴性对照 | 1mL |
dsDNA定量阳性对照 | 1mL |
PicoGreen工作液 | 30mL |
保存:2~8℃,有效期6个月。
Qubit荧光仪或类似荧光仪
一、反应设置
- 如果有N个样本,则标记N+2个0.5mL PCR薄壁管(需要跟所用荧光仪兼容),其中N个管用于N个样本,另外两个一个标为NC,用于阴性对照。一个标为PC,用于阳性对照。注意:不要标注在管壁以免干扰荧光采集。
- 在N个样品管中,分别加入跟编号对应的10μL样本。如果只想用5μL样本测试,可以用超纯水补到10μL。
- 在NC管和PC管中分别加入10μL本试剂盒提供的NC和PC。
- 然后每管中加入190μL本试剂盒提供的PicoGreen工作液。
- 涡旋震荡3秒,避免气泡产生,室温避光放置3分钟。
- 立即用Qubit系列或类似的荧光仪进行测定。如果暂时不测,上步的反应液可以放置3小时而荧光信号不会降低。
二、用Qubit 2测定荧光
- 在仪器操作界面,选择DNA模板,选择检测类型为dsDNA High Sensitivity。
- 选择Read Standard进入标准品测定模式。
- 先将NC反应管插入仪器的样品槽,关上盖子,按Read Standard读取数据,结束后移出NC反应管。
- 再将PC反应管插入仪器的样品槽,关上盖子,按Read Standard读取数据,结束后移出PC反应管。
- 选择Run Samples进入样本测定模式。
- 先将1号反应管插入仪器的样品槽,关上盖子,按Read Standard读取数据,结束后移出1号反应管。
- 再将2号反应管插入仪器的样品槽,关上盖子,按Read Standard读取数据,结束后移出2号反应管。
- 以此类推,直到将N个反应管测完。
- 按Qubit 2手册分析数据。
三、或用Qubit 3测定荧光
- 同第7~10步。
- 选择Run Samples进入样本测定模式。
- 在旋转轮面板上选择所用测试样本的体积10μL。
- 在下拉菜单中选择汇报结果所用的浓度单位。
- 先将1号反应管插入仪器的样品槽,关上盖子,按Read Standard读取数据,结束后移出1号反应管。
- 再将2号反应管插入仪器的样品槽,关上盖子,按Read Standard读取数据,结束后移出2号反应管。
- 以此类推,直到将N个反应管测完。
- 按Qubit 3手册分析数据。
四、或用其他荧光仪测定荧光
- 按相关仪器手册进行操作。激发波长需要选择480nm,发射波长选择530nm。
本检测所能耐受的常见污染物的残留浓度(指在所用10μL样本中的浓度)
类别 | 成分 | 残留浓度 |
盐类 | 乙酸铵、乙酸钠、氯化钠 | 200mM |
氯化镁 | 40mM | |
有机溶剂 | 乙醇 | 20% |
氯仿 | 4% | |
苯酚 | 2% | |
去污剂 | Sarcosyl | 2% |
SDS | 0.2% | |
Triton X-100 | 0.02% | |
CTAB | 0.001% | |
其他 | RNA | 跟待测DNA等浓度 |
聚乙二醇 | 20% | |
琼脂糖 | 2% | |
BSA | 400μg/mL | |
dNTP | 2mM |
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