产品目录

PicoGreen是一种特异性结合双链DNA (dsDNA)的饱和荧光染料，激发波长为480nm，发射波长为520nm，与大多数荧光计和荧光酶标仪兼容。PicoGreen仅与dsDNA结合后才发出荧光，不受核苷酸和单链核酸的影响，产生的荧光强度与dsDNA浓度成正比，且无序列依赖性，非常适合于dsDNA的定量检测，可检出25pg/mL~1μg/mL浓度范围内的dsDNA。

由于PicoGreen灵敏度高、特异性强、耐受性好、无需纯化DNA，可用于DNA残留检测。当dsDNA浓度在1.25～80ng/mL范围内时线性最好(R²>0.99)。

• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
  
• PicoGreen工作液最好现配现用，以保证最佳结果；
  
• PicoGreen荧光强度受温度影响较大，应保证绘制标准曲线和样品测定在同一恒定温度下进行；
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 染料工作液配制
  PicoGreen原液以浓缩液形式保存在无水的DMSO（二甲基亚砜）中。实验时，一般应将原液用1×TE按1:100的比例稀释，配制成2×染料工作液，然后按1:1比例与待测样品混合，使PicoGreen终浓度为1×。由于本试剂容易吸附到玻璃表面，应在塑料容器中配制，并注意尽量避光。染料工作液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
  
• 实验方法
  
  • 标准液配制：
    取Sigma小牛胸腺DNA干粉1mg（Tris，NaCl等浓度已成标准体系），加入1mL双蒸水，配制成1mg/mL的标准液。
    
  • 染料工作液配制：
    取10μL PicoGreen原液，加入990μL 1×TE缓冲液，配制成2×染料工作液。
    
  • 标准品工作液配制：
    
    • 母液稀释：取10μL (1mg/mL)标准液加入到990μL 1×TE缓冲液中，稀释成10μg/mL标准品工作液；再取10μL (10μg/mL)标准品工作液加入到990μL 1×TE缓冲液中，稀释成100ng/mL的标准品工作液。
      
    • 倍比稀释：取800μL (100ng/mL)的标准品工作液加入到200μL 1×TE缓冲液中，浓度为80ng/mL；再取500μL (80ng/mL)标准品工作液加入到500μL 1×TE缓冲液中，稀释到40ng/mL；依次倍比稀释，配成20ng/mL、10ng/mL、5.0ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL的标准品工作液。
  • 标准曲线绘制：
    分别将倍比稀释后的1.25ng/mL~80ng/mL标准品工作液和2×染料工作液按1:1体积混匀（具体体积根据荧光设备和容器的要求确定），避光、室温放置5min。使用荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，注意不要在样品中引入气泡，轻弹比色皿外部以驱散气泡。以1×TE缓冲液为空白对照，设定激发波长480nm，发射波长520nm，在恒定温度下测定样品和空白对照的荧光值。或者使用96孔酶标板在荧光酶标仪中检测。检测结束后，以各浓度荧光值减去空白对照荧光值，再与标准品溶液浓度(ng/ml)进行线性回归，绘制标准曲线。
    
  • 待测样品浓度测定：
    将待测样品溶液和2×染料工作液按1:1体积混匀，采用2.d.中同样的方法，在相同温度下测定待测样品的荧光强度（必要时先使用TE缓冲液将待测样品稀释到PicoGreen线性范围之内），根据标准曲线的线性回归方程，计算待测样品浓度。