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本制品是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成试剂盒，包含M-MLV逆转录酶及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs,Oligo(dT)₂₀ VN和随机引物等一链cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的cDNA，下游可用于qPCR、普通PCR等实验。

RNA中存在基因组DNA污染，如果反转录前不做去除处理，下游进行qPCR反应时基因组DNA与cDNA会同时进行扩增，尤其是引物设计在同一外显子上时。本试剂盒采用dsDNase高效去除基因组DNA污染，区别于常规的DNase I，dsDNase能够特异性的消化双链DNA（dsDNA以及DNA与RNA的杂合链），并且具有热敏感性，可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用DNase I去除基因组DNA污染的方法相比，dsDNase无需额外加入EDTA进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)作为升级后的一链cDNA合成试剂盒，15分钟内最长可获得12kb cDNA。可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组DNA污染与反转录分开进行的操作方法，或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。

• 预混液中已经包含Oligo(dT)₂₀VN和随机引物，不仅适用于包含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。
  
• 由于随机引物会在RNA任意位置开始逆转录，因此不建议使用本制品进行真核生物全长cDNA克隆。如需获得真核生物的全长cDNA，建议使用第一链cDNA合成预混液(可选引物，货号：BM0306)。

• 针对基因组DNA含量低的RNA样品（推荐方案）
  
  • 于冰上配制如下反应体系：
    

    成分	用量
    模板RNA	50ng～1μg
    All-in-One 1st Synthesis MasterMix	4μL
    dsDNase	1μL
    Nuclease-Free Water	至20μL

    • 推荐使用试剂盒提取的高质量RNA作为模板。
  • 轻柔吸打混匀，瞬离；
    
  • 37℃温育2min，以去除基因组DNA污染；
    
  • 55℃温育15min；
    
  • 反应结束后，85℃温育5min以终止反应；
    
  • 迅速将获得的cDNA置于冰上，用于后续实验；或立即保存于-20℃。
• 针对基因组DNA含量高的RNA样品
  
  • 基因组DNA污染去除
    
    • 于冰上配制如下反应体系：
      

      成分	用量
      模板RNA	50ng～1μg
      dsDNase	1μL
      10×dsDNase Buffer	1μL
      Nuclease-Free Water	至10μL

      • 推荐采用试剂盒提取的RNA作为模板。
    • 轻柔吸打混匀，瞬离；
      
    • 37℃温育2min，以去除基因组DNA污染；
      
      • 若RNA中基因组DNA污染严重，可适当延长37℃温育时间至5min。
    • 65℃温育2min，使dsDNase失活，冰上放置。
  • 第一链cDNA合成
    
    • 于冰上配制如下反应体系：
      

      成分	用量
      上一步反应产物	10μL
      All-in-One 1st Synthesis MasterMix	4μL
      Nuclease-Free Water	至20μL

    • 轻柔吸打混匀，瞬离；
      
    • 50℃温育15min；
      
      • 若目标RNA不含Poly(A)结构，可预先25℃温育10min。
    • 反应结束后，85℃温育5min，以终止反应；
      
    • 将获得的cDNA溶液置于冰上，用于后续实验。
      
      • cDNA溶液置于-20℃储存，建议不超过1周；置于-80℃可长期储存。