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本制品为非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6～2.4U/mL。


分散酶II一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶(如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等)相比，该酶具有以下优势：

• 一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；
  
• 来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；
  
• 稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；
  
• 可用于多种类型组织和细胞的分离等。

最佳pH	6.0～8.5
比活性	≥0.8U/mg (+37℃,casein as substrate,pH7.5)
抑制剂	EDTA,EGTA,Hg2+，其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。
激活剂	Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+浓度为2mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。

在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1μM(181μg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。

组分	100mg	1g
分散酶II	100mg	1g
说明书	1份	1份

保存：2～8℃，有效期2年。

• 用Hepe缓冲盐溶液(50mM Hepes/KOH pH7.4,150mM NaCl)溶解适量本品冻干粉，配制成10mg/mL的储存液，用0.22μM滤膜过滤除菌。
  
• 使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6～2.4U/mL。
  注：不推荐使用高于2.4U/mL的工作浓度。

• 组织的解离
  
  • 用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；
    
  • 用无菌PBS清洗组织块；
    
  • 向上述组织块中加入Dispase II溶液(工作浓度为0.6～2.4U/mL)，并确保组织块全部浸没于Dispase溶液中。
    
  • 37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。
    注：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间(如数小时)的孵育也不会明显影响细胞活性。
    
  • 如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。
    
  • 离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；
    
  • 用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。
• 细胞传代
  
  • 利用Dispase溶液(37℃预热)浸没细胞，于37℃孵育5min；
    
  • 吸除上述溶液，继续于37℃孵育10min；
    
  • 显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15min；
    
  • 利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；
    
  • 换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。

相关搜索：分散酶II，Dispase II