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本制品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉，经γ射线处理灭活病毒，酶活≥ 250 units/mg。广泛用于细胞传代，将贴壁细胞从培养板上消化水解下来制备单细胞悬液，常用的工作浓度是0.25～5%(w/v)。

• 有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯；
  
• 来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；
  
• 银离子；
  
• 特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK等；

• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换，
  
  • 1 BAEE U：在25℃，pH7.6的条件下，以BAEE为底物，3.2mL的反应体系中，A253吸光值每分钟会发生0.001的变化即为一个胰蛋白酶酶活单位。
    
  • 1 TAME U：在25℃，pH8.2，0.001M的Ca²⁺的条件下，每分钟水解1μM的TAME的样品量。
    
  • 1 USP U：在指定条件下，每分钟引起吸光值发生0.003的变化的样品活性。
    
  • 1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit
• 本制品仅作科研用途！

• 胰酶浓缩液(0.25%)的配制
  称取0.25g胰酶粉末溶于100mL HBSS(无钙，镁)缓冲液，并调整pH在7.4～7.6范围。此时得到的即0.25%胰酶浓缩液，置于4℃短时间保存，3个月相对稳定。建议分装冻存，利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀，属于正常现象，不会影响其使用效力。
  注：冻干粉也可溶于其他不含钙镁离子的平衡盐缓冲液如PBS。
  细胞的消化可以直接用胰酶溶液，但通常使用的是胰酶-EDTA溶液，因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂，能够螯合钙镁离子，减少细胞间的粘附性，从而增强胰酶的活性。
  
• 胰酶-EDTA溶液的配制(0.25%(w/v))：
  

  成分	用量
  无Ca2+、Mg2+及酚红的平衡盐溶液	至500mL
  胰蛋白酶	1.25g
  EDTA	0.10g

• 贴壁细胞的消化
  
  • 方法一
    
    • 移除培养板中的培养液，用不含Ca²⁺、Mg²⁺的缓冲液清洗单层贴壁细胞，直至清除残余血清，吸除盐溶液。
      
    • 向上述贴壁细胞中加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，至完全覆盖细胞即可。
      
    • 倾斜培养板，吸取胰酶-EDTA溶液，反复吹洗细胞数次，注意消化时间不可过长。
      注：消化时间跟细胞类型、细胞密度、所用血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间有关。
      
    • 将细胞于室温孵育直至细胞分离，期间可将细胞培养板置于显微镜下观察，避免细胞过度消化，从而避免胰酶对细胞造成的损伤。
      
    • 加入10mL细胞培养液，轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离，吹洗时尽量避免气泡的产生。
      
    • 进行下一步操作或将细胞冻存。
      注：操作时务必小心谨慎，同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。
  • 方法二
    以25cm2 T-Flask为例。
    
    • 无菌条件下吸除培养瓶中培养液。
      
    • 加入3mL冰的胰蛋白酶-EDTA溶液(配方同上)。
      
    • 孵育30 s(或更长，如果需要)。置于低倍镜观察，如果有部分细胞开始变圆脱离培养瓶壁，此时可吸除胰酶溶液，继续孵育至细胞完全脱落。
      
    • 加入10mL新鲜MEM培养液，可用枪快速的将培养液加入，有助于使细胞脱落；然后使用相同的枪头，轻轻地多次吹洗细胞并混匀后，吸取其中5mL于一个新的培养瓶中。
      
    • 置培养条件下孵育。