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本制品是一种传统的植物细胞、组织或原生质体快速裂解液。植物RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。

本制品可以用于植物细胞、组织或原生质体样品，也可以用于动物的细胞或组织样品、真菌或细菌样品。

本制品的主要有效成分包括1% Triton X-100、1% sodium deoxycholate和0.1% SDS等去垢剂，以及sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA和leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

用本制品解得到的蛋白样品，可以用我公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号：YT036或YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

• 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
  
• 需自备PMSF，也可以向我公司订购PMSF (货号：YT615)。也可以选购总体效果更佳的通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4015)，或者根据具体用途选择植物样品蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4016)、通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容，货号：YTB4017)、哺乳动物样品蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4018)、真菌或酵母蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4019)、细菌蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4020)。如果无需检测磷酸化蛋白，也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂化合物。
  
• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

• 对于培养的植物细胞样品：
  
  • 融解植物RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
    
  • 离心收集植物细胞，按照每50～100万细胞加入100～200μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，在冰上裂解2～10分钟。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
• 对于植物原生质体样品：
  
  • 把组织剪切成细小的碎片，制备原生质体。
    
  • (可选)质粒转化原生质体，继续培养16～48小时，并可以根据需要给予适当的实验条件处理。
    
  • 100～500g低速离心收集原生质体。
    
  • 融解植物RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
    
  • 按照每50～100万原生质体加入100～200μL裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的原生质体沉淀。如果原生质体量较多，必需分装成50～100万原生质体/管，然后再裂解。大团的50～100万原生质体较难裂解充分，而少量的50～100万原生质体由于裂解液容易和50～100万原生质体充分接触，相对比较容易裂解充分。
• 对于植物组织样品：
  
  • 把植物组织剪切成细小的碎片。
    
  • 融解植物RIPA细胞裂解液(强)，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
    
  • 按照每20mg植物组织加入100～200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
    
  • 用玻璃匀浆器匀浆，或使用手持式组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    
  • 如果植物组织样品本身非常细小和柔嫩，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解比较充分。
    
    • 植物RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。