产品货号:
YTB4012
中文名称:
植物细胞裂解液(用于Western/IP/ELISA)
英文名称:
Plant Cell lysis buffer for Western or IP
产品规格:
100ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是一种在非变性条件下裂解植物细胞、组织或原生质体样品从而制备蛋白样品的裂解液,也可以用于动物的细胞或组织样品、真菌或细菌样品。本裂解液裂解的植物细胞、组织或原生质体样品,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。
本制品主要有效成分包括1% Triton X-100等去垢剂,以及sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、Na3VO4、leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。裂解得到的蛋白样品,可以用我司的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036、YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
组分 | 规格 |
植物细胞裂解液(用于Western/IP/ELISA) | 100mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期1年。
- 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
- 需自备PMSF,也可以向我公司订购PMSF (货号:YT615)。也可以选购总体效果更佳的通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号:YTB4015),或者根据具体用途选择植物样品蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号:YTB4016)、通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容,货号:YTB4017)、哺乳动物样品蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号:YTB4018)、真菌或酵母蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号:YTB4019)、细菌蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号:YTB4020)。如果无需检测磷酸化蛋白,也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂化合物。
- 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
- 对于培养的植物细胞样品:
- 融解植物Western及IP细胞裂解液,混匀。取适量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
- 离心收集植物细胞,按照每50~100万细胞加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触,在冰上裂解2~10min。
- 充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
- 融解植物Western及IP细胞裂解液,混匀。取适量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
- 对于植物原生质体样品:
- 把组织剪切成细小的碎片,制备原生质体。
- (可选)质粒转化原生质体,继续培养16~48小时,并可以根据需要给予适当的实验条件处理。
- 100~500g低速离心收集原生质体。
- 融解植物Western及IP细胞裂解液,混匀。取适量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
- 按照每50~100万原生质体加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的原生质体沉淀。如果原生质体量较多,必需分装成50~100万原生质体/管,然后再裂解。大团的50~100万原生质体较难裂解充分,而少量的50~100万原生质体由于裂解液容易和50~100万原生质体充分接触,相对比较容易裂解充分。
- 把组织剪切成细小的碎片,制备原生质体。
- 对于植物组织样品:
- 把植物组织剪切成细小的碎片。
- 融解植物Western及IP细胞裂解液,混匀。取适量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
- 按照每20mg植物组织加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
- 用玻璃匀浆器匀浆或使用组织研磨仪研磨,直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。
- 充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
- 如果植物组织样品本身非常细小和柔嫩,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解比较充分。
- 把植物组织剪切成细小的碎片。
附录1.各种裂解液主要特点、差异和选择
货号 | 产品名称 | 有效裂解成分 | 裂解强度 | 对膜蛋白的提取 | 对胞浆蛋白的提取 | 对核蛋白的提取 | 胞浆磷酸化蛋白提取 | 细胞核转录因子提取 | 含蛋白酶抑制剂 | 含磷酸酯酶抑制剂 | 不同物种样品兼容性 | 主要用途 |
YT038 | WB及IP细胞裂解液 | 1% Triton X-100 | 温和 | 一般 | 很好 | 较好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | WB,IP,co-IP |
YT609 | RIPA裂解液(强) | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS | 强 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | WB,IP |
YT610 | RIPA裂解液(中) | 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS | 中 | 较好 | 很好 | 较好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | WB,IP |
YT611 | RIPA裂解液(弱) | 1% NP-40, 0.25% deoxycholate | 温和 | 一般 | 很好 | 较好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | WB,IP,co-IP |
YT613 | NP-40裂解液 | 1% NP-40 | 温和 | 一般 | 很好 | 较好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | WB,IP,co-IP |
YT039 | SDS裂解液 | 1% SDS | 强 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | WB,ChIP |
YT040 | Western及IP细胞裂解液(无抑制剂) | 1% Triton X-100 | 温和 | 一般 | 很好 | 较好 | 很好 | 很好 | 否 | 否 | 高 | WB,IP,co-IP |
YT614 | RIPA裂解液(强,无抑制剂) | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS | 强 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 否 | 否 | 高 | WB,IP |
YTB4012 | 植物Western及IP细胞裂解液 | 1% Triton X-100 | 温和 | 一般 | 很好 | 较好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | 植物WB,IP,co-IP |
YTB4013 | 植物RIPA裂解液(强) | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS | 强 | 很好 | 很好 | 较好 | 很好 | 很好 | 是 | 是 | 高 | 植物WB,IP |
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