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本制品是一种专门为类器官传代培养设计的不含酶的解离试剂，适用于需要避免酶活性影响实验结果的情况，可以非常温和地将胚胎干细胞、诱导多能干细胞(iPSC)等纯度和活性要求较高的细胞解离成单细胞悬液或寡细胞团(由10～30个细胞组成)，也可用于从肠隐窝中分离肠细胞以及细胞传代时的消化处理。本制品为百奥莱博BalbOrganoid系列类器官培养液的配套试剂。百奥莱博同时提供含蛋白酶和胶原酶等复合酶的BalbOrganoid类器官传代酶解液。

本制品温和、高效。相比常规的Trypsin-EDTA溶液，本制品作为一种不含酶的解离试剂，可有效保持细胞的完整性和功能性，对于要求高纯度和高活性的细胞、特定细胞表面标记物以及需维持细胞间相互作用的研究来说，使用本制品可更好地保留细胞表面受体的完整性，减少对细胞膜的损伤，保持传代后细胞的活力，温和而有效地解离和分散细胞。百奥莱博同时提供可快速解开基质胶中蛋白质大分子间交联的类器官分离回收液。

类器官(Organoid)通常指在体外显示出与体内器官或组织相似结构和功能的复杂三维(3D)结构，更严格的定义是指由干细胞或器官祖细胞发育而来的，作为体外平台模拟其对应器官的结构和功能等多个方面的3D细胞培养物。类器官在形成过程中，细胞自我组建并分化为功能型的微小细胞团，模拟真实器官发育，以与体内相似的方式由细胞分序与空间特异性的谱系分化调控，需激活由细胞内在成分和外在环境(细胞外基质、培养液等)介导的各种信号通路。

• 在使用本制品的过程中要特别注意避免被细菌污染。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 肠隐窝分离：
  
  • 本步骤以小鼠肠道隐窝解离为例。
  • 将BalbOrganoid类器官传代温和消化液平衡至室温。
    
  • 从小鼠中分离出所需部分肠道，并用提前预冷的PBS仔细冲洗几次以去除内容物。
    
  • 用剪刀小心将肠道纵向切开，并横向切成2～5mm的小段。
    
  • 将分割好的肠道片段投入含适量D-PBS的离心管中，轻轻摇晃洗涤，然后弃去D-PBS。重复本步骤洗涤肠道片段直至液体澄清。
    
  • 将BalbOrganoid类器官传代温和消化液加入装有肠道片段的离心管中，确保所有组织都被覆盖。
    
  • 37℃孵育10～30分钟，用户可根据实际情况对孵育时间进行调整。孵育期间每隔一段时间轻柔地摇晃离心管以促进解离。对于较为难解离的片段，可以轻柔吹打组织悬液数次以帮助组织分散。
    
  • 使用70μm细胞过滤器对组织悬液进行过滤，去除未完全解离的大块组织碎片。
    
  • 200×g，4℃离心5分钟，收集沉淀，然后用适量D-PBS重悬。
    
  • 加入含有血清或者血清替代物的培养液以终止可能剩余的解离活动。
    
  • 根据实验需求，对分离的隐窝使用细胞计数板进行计数，以便后续培养或鉴定。
• ESC和iPSC细胞解离：
  
  • 本步骤以6孔板为例。其它孔板检测试剂的用量参考6孔板的用量进行适当调整。
  • 将BalbOrganoid类器官传代温和消化液平衡至室温。
    
  • 小心弃去旧的培养液，用适量D-PBS轻轻冲洗细胞层1～2次以去除残留的培养液。
    
  • 每孔加入500μL的BalbOrganoid类器官传代温和消化液，摇晃培养容器使其覆盖整个细胞层。
    
  • 37℃孵育5～10分钟，用户可根据实际情况对孵育时间进行调整。孵育期间每隔一段时间轻柔地摇晃培养板以促进解离。
    
  • 去除BalbOrganoid类器官传代温和消化液，迅速加入预热的含血清或血清替代物的培养液以终止解离活动。
    
  • 轻轻吹打细胞悬液，帮助细胞分散为单细胞悬液或寡细胞团(由10～30个细胞组成)，过程中需避免损伤细胞。
    
  • 根据实验需求，对分离的ESC细胞或iPSC细胞使用细胞计数板进行计数，以便后续培养或鉴定。