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HiperTrans悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂，经优化专门用于悬浮细胞的转染，且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。HiperTrans悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。

组分	100μL	500μL	1mL	5×1mL
HiperTrans脂质体核酸转染试剂(悬浮细胞专用)	100μL	500μL	1mL	5×1mL
说明书	1份

保存：2～8℃，不可冷冻，有效期1年。

• 为得到最优的转染效率，请先用无血清培养基(如OPTI-MEM I培养基)稀释HiperTrans Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent(以下简称HiperTrans)，之后与DNA或RNA做混合。
  
• 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，务必确保质粒的高纯度和无菌状态，彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐，因为上述酚类会对细胞造成损失，而高盐分会干扰“HiperTrans-复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌，务必去除。
  
• 转染时培养基中不能添加抗生素。
  
• 阳离子脂质体应该在2～8℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
  
• 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和HiperTrans的比例，通常推荐是1:2或1:3

以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例，推荐以下转染条件：
最终转染体积：30mL
转染细胞数目：3×10⁷ cells(最终细胞密度：1×10⁶ cell/mL)，转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。
质粒DNA量：20～40μg (typically use 30μg)
转染试剂量：40～80μL (typically use 60μL).Use 2μL HiperTrans per 1μg of plasmid DNA transfected.


使用以下步骤在30mL总体系内转染293细胞，转染过程中生长培养基内不要添加抗生素，否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组(无DNA，无HiperTrans)。
注：对于其他的培养总体系，按比例放大或者缩小各组分用量。

• 转染当天，在配制复合物之前，准备转染需要的细胞量(见上推荐转染条件，即28mL生长培养基内加入3×10⁷ cells，台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团，并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。)
  注：为了达到最优效率，确保单细胞悬液。
  
• 按照以下方法配制HiperTrans-DNA复合物，
  
  • 用无血清培养基(如OPTI-MEM I)稀释30μg质粒DNA，使其终体积为1mL；
    
  • 用无血清培养基(如OPTI-MEM I)稀释60μL HiperTrans，使其终体积为1mL；轻轻混匀，于室温孵育5min；
    注：过长时间孵育会降低效率。
    
  • 孵育5min之后，将稀释的质粒DNA加入稀释的HiperTrans，使其总体积为2mL。轻轻混匀。
    
  • 室温孵育20～30min，使得DNA-HiperTrans复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
    注：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5h。
• 孵育完全后，将2mL DNA-HiperTrans复合物加入28mL含293悬浮细胞的生长培养基内，使得细胞最终的密度约为1×10⁶ cell/mL。对于阴性对照，用2mL无血清培养基(如OPTI-MEM I)替换。
  
• 37℃，8% CO₂轨道摇床培养，转速125rpm，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6h后更换生长培养基，不会降低转染活性。

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